[发明专利]神经损伤修复制剂

说明书

本发明涉及一种生物制剂，尤其涉及一种应用于神经损伤修复手术中的生物制剂。

传统观念认为中枢神经细胞不能再生，脊髓损伤导致的神经功能障碍是不可逆的，如外伤性截瘫至今仍是医学界急待解决的难题。近年来，随着基础研究的近展及新技术的应用，这一传统观念发生了变化，自80年代以来神经组织移植进入高潮。目前，胎脑、脊髓组织移植通常采用三种方法：

1、将移植物直接放入脊髓损伤的实质中；

2、将脊髓断端坏死部分先行切除，清除破碎组织，将移植物通过健康的脊髓部位注射到断端区，使移植物充分固定；

3、将移植物注射到脊髓断端的空隙中，然后用蜘网膜和硬脑膜包绕和覆盖，或同时做大网膜移植；当移植物为细胞悬液时则采用多点注射的方法。对外周神经的断裂损伤则一般采用显微外科缝合。

肾髓损伤后的几种神经组织移植方法存在以下几点不足：

1、移植组织块中心部分的缺血，缺氧坏死。

2、神经组织移植时易带入大量非神经细胞，过渡增殖的神经胶质细胞，易形成断端囊腔及瘢痕，使神经轴突再生时越过断面接通脊髓形成了障碍。

3、近年来以大网膜包裹移植物，以求使得局部血循环得到改善，但患者承受的痛苦大，需要从腹腔剪取大网膜，增加手术复杂性。

4、脊髓严重挫灭、缺损时，移植物注射在两断端，期待新生的神经轴突越过2-3cm的缺损区向另一断端生长，接通断裂的脊髓并重建功能是困难的。外周神经损伤后，手术中缝合处理有以下不足：

1、缝线做为一种异物是不被吸收的，对吻合口的异物刺激是长久的。

2、马尾神经缺乏结缔组织不易缝合，吻合难度大，过多的操作必然会加重吻合口两断端的损伤。

3、由于缝线的作用会造成吻合口两侧的缺血改变，引起局部血循环障碍。

本发明的目的是提供一种简单、易行，能够促进神经再生，促进微血管新生的肾髓及外周神经损伤修复制剂。

纤维蛋白原在纤维蛋白酶的作用下形成纤维蛋白，而纤维蛋白纤维互相交织而构成网状物，网隙中可充满神经细胞和神经营养物质，此结构在神经损伤修复中可将神经营养物质局限在神经损伤部位，并缓释作用，从而促进神经细胞的生长、分化、促进神经再生，促进微血管新生，达到修复神经的目的。本发明就是基于这样的原理而设计的。由于脊髓、马尾及其它张力较高的外周神经损伤后修复条件及方法不同，为临床使用方便，尽可能节约制剂，降低成本，本发明的神经损伤修复制剂可分为A、B、C三种产品。

一、神经损伤修复制剂A

制剂A应用于各种原因造成的脊髓损伤的修复，神经细胞移植，脊髓重建。该制剂由二部分组成，即部分I、部分II，

部分I包括下列组分：每毫升0.05摩尔/升PH值为7.4的三羟甲基胺基甲烷(Tris)生理盐水缓冲液配以纤维蛋白原5-10毫克；

部分II由下列组分组成：每8.0毫升伊格氏(Eagle′s)MEM培养液配以：

0.025摩尔/升CaCl₂水溶液        0.3-0.5毫升

神经生长因子(NGF)               2000-4000生物活性单位(BU)

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)    5000-20000生物活性单位(BU)

运动神经生长因子(MNGF)          4-16生物活性单位(BU)

纤维蛋白酶(Thrombin)            200-500国际单位(IU)

为了增强制剂使用时的抗纤溶作用，该制剂部分I中还可包括抑肽酶，其量为每毫升0.05摩尔/升PH为7.4的三羟甲基胺基甲烷生理盐水缓冲液配以抑肽酶2000-3000胰蛋白酶标定单位(TIU)。抑肽酶可使纤维蛋白凝胶块抗溶时间延长，使该制剂更好地达到缓释作用。

本制剂各组分均为无菌分装，4℃以下贮存备用。其使用方法为：

a、将组成试剂的各组分放入37℃的温箱中保温15-30分钟；

b、将部分I各组分混匀制成纤维蛋白原溶液，将部分II各组分混匀制成纤维蛋白酶神经细胞营养液；

c、冰浴下取12-16周水囊引产胎儿脊髓，分离胸、腰段，用纤维蛋白酶神经细胞营养液制备细胞悬液，使之成为6-7×10^6-7细胞/毫升；

d、将细胞悬液接种于培养皿中，然后放入37℃的培养箱中孵育30-60分钟；