[发明专利]成纤维细胞生长因子15

说明书

本发明涉及新近鉴别的多核苷酸、由这些多核苷酸编码的多肽、这些多核苷酸和多肽的用途以及这些多核苷酸和多肽的生产方法。更具体地说，本发明的多肽已被推定性地鉴定为成纤维细胞生长因子/肝素结合生长因子(此后称作“FGF-15”)。本发明也涉及抑制这些多肽的作用的方法。

成纤维细胞生长因子是以结合肝素为特征(并且由此也称为肝素结合生长因子(HBGF))的一个家族。在各种组织中发现这些蛋白质的不同成员的表达，所述表达在特定时间和空间控制下。这些蛋白质是中胚层、外胚层和内胚层来源的细胞的有效的促细胞分裂剂，所述细胞包括成纤维细胞、角膜和血管内皮细胞、粒细胞、肾上腺皮质细胞、软骨细胞、成肌细胞、血管平滑肌细胞、晶状体上皮细胞、黑素细胞、角质形成细胞、少突神经胶质细胞、星形细胞、成骨细胞和生血细胞。

每种成员都具有与其它成员重叠的功能，也具有独特的功能范围。除了刺激血管内皮细胞增殖外，FGF-1和2两者都是内皮细胞趋化性的，并且FGF-2已显示出能够使内皮细胞穿透基底膜。FGF-1和2两者都具有刺激血管形成的能力。这些生长因子的另一个重要特征是它们促进伤口愈合的能力。FGF家族的许多其它成员都具有与FGF-1和2类似的活性，例如促进血管形成和伤口愈合。FGF家族的几个成员已显示出诱导中胚层形成和调节神经元细胞、脂肪细胞和骨骼肌细胞的分化。

除了在正常组织中的这些生物学活性外，已暗示FGF蛋白质通过促进肿瘤血管形成促进癌和肉瘤发生，当它们的表达失控时，其作为转化蛋白质。

FGF家族目前由8个结构相关的多肽组成：碱性FGF、酸性FGF、int 2、hst1/k-FGF、FGF-5、FGF-6、角质形成细胞生长因子、AIGF(FGF-8)，神经胶质激活因子最近被查明为新的肝素结合生长因子，其是从人类神经胶质瘤细胞系培养物上清液纯化的(Miyamoto，M.等，分子和细胞生物学，13(7)：4251-4259(1993))。各种多肽的基因已被克隆和测序。两个成员FGF-1和FGF-2被用许多名称表征，但最常见的是分别被称为酸性和碱性成纤维细胞生长因子。正常基因产物影响大多数中胚层和神经外胚层来源的细胞的一般的增殖能力。它们能够体内诱导血管形成，并可以在早期发育中起重要作用(Burgess，W.H.和Maciag，T.，生物化学年评，58：575-606，(1989))。

FGF家族的许多以上鉴定的成员也结合到相同的受体上，并通过结合这些受体引发第二信使(message)。

编码分泌形式的FGF-1的真核表达系统已通过基因转移引入到猪动脉中。这种模型确定了在动脉壁中的基因的功能。在基因转移21天后，FGF-1的表达诱导猪动脉内膜变厚(Nabel，E.G.，等，自然，362：844-6(1993))。已进一步地阐明，碱性成纤维细胞生长因子可以调节神经胶质瘤生长，并且不依赖于其在肿瘤血管形成中的作用进行，也阐明碱性成纤维细胞生长因子释放或分泌对这些作用可能是需要的(Morrison，R.S.，等，神经科学研究杂志，34：502-9(1993))。

还有暗示成纤维细胞生长因子(如碱性FGF)在体外卡波济氏肉瘤细胞的生长中起作用(Huang，Y.Q.，等，J.Clin.Invest.，91：1191-7(1993))。编码人类碱性成纤维细胞生长因子的cDNA序列已被克隆到由噬菌体T7 RNA聚合酶识别的转录启动子下游。如此获得的碱性成纤维细胞生长因子在致有丝分裂性(mitogenicity)、血纤蛋白溶酶原激活剂合成和血管形成测定中被查明具有与人类胎盘成纤维细胞生长因子无法区别的生物学活性(Squires，C.H.，等，生物化学杂志，263：16297-302(1988))。

美国专利5,155,214公开了实质上纯化的哺乳动物碱性成纤维细胞生长因子和其生产方法，公开了牛和人类碱性成纤维细胞生长因子的氨基酸序列，以及编码牛物种多肽的DNA序列。