[发明专利]新的免疫避孕肽

说明书

本发明涉及能够诱发抗透明带蛋白ZP3的免疫应答的肽，用该肽产生能与其发生免疫反应的抗体、单克隆抗体的用途，能产生所述抗体的杂交瘤细胞系，将所述肽或所述抗体用于制备避孕疫苗的用途，含有所述肽或抗体的避孕疫苗，将所述肽用于检测样品中抗ZP3的自身免疫抗体的用途，含有所述抗体的诊断试剂盒和用于检测样品中抗ZP3的自身免疫抗体的检验试剂盒。

透明带(ZP)是哺乳动物卵母细胞周围的复合胞外糖蛋白基质。该基质是在卵母细胞成熟初期和卵泡发育初期形成的，它包括三种高度糖基化的蛋白，被称为ZP1、ZP2或ZP3。所述ZP在受精过程中起着重要作用，因为哺乳动物配子之间的首次相互作用是由精子与ZP上的特异受体的结合引起的。在小鼠中，ZP3糖蛋白已被证实为位于精子表面膜里的互补分子的迎精体(其综述参见Wasserman，Development 108：1-17，1990)。ZP3的上述配体功能可引发一种被称为顶体反应的过程，该反应的结果会释放出蛋白酶，使得所述精子穿透透明带并通过与卵母细胞的质膜融合而使卵母细胞受精。

ZP3糖蛋白在精-卵相互作用中的重要作用及其卵母细胞特异表达的事实提示我们，ZP蛋白可作为理想的靶抗原，用于开发避孕疫苗(例如，Gwatkin等，Fert.Ster.28：871-877，1977；Paterson和Aitken，Gurr.Opinion in Immunol.，2：743-747，1990)。在很多研究中都已证实，给哺乳动物接种猪的透明带蛋白可产生抗所用抗原的高抗体效价，并伴随不育。通过体外研究，也可获得了预示ZP3免疫的避孕效果的结果。业已证实，抗ZP3特异抗体能抑制雄配子同盐储人卵母细胞的结合(van Duin等，Hum.Reprod.9(Suppl.4)：41，1994)，而且还会破坏人体的体外受精(Henderson等，Gam.Res.，1988)。

用天然ZP3蛋白为靶抗原，通过工程方法制备基于ZP3的疫苗是不可行的，因为这种生物材料极为有限。最近对编码ZP蛋白基因的克隆解决了上述问题，从而提供了产生重组ZP3蛋白或其片段的可能性。所述鼠ZP3 DNA的克隆及鉴定构成了迈向这一目的的重要步骤(Ringuette等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：4341-4345，1986；Rin-guette等，Dev.Biol.，127：287-295，1988)。已披露了各种哺乳动物ZP3基因的克隆及相关ZP3蛋白的一级氨基酸序列，如人ZP3(WO 90/15624)、仓鼠ZP3(Kinloch等，Dev.Biol.，142：414-421，1990)、绒猴ZP3(WO 94/10304)、猪ZP3(WO 93/14786)、猫ZP3(JP-A-06014784；WO 94、11019)、狗ZP3(JP-A-05336974；WO 94、11019)、兔ZP3(WO 94/11019)、牛ZP3(WO 94/11019)和弥猴ZP3(WO 94/11019)。迄今所阐明的所有哺乳动物ZP3氨基酸序列都表现出很高的进化保守性，氨基酸的同源性在65～90％的范围内。不同哺乳动物物种的这种蛋白的N-末端的保守性较差，这表明ZP3蛋白的这一部分在哺乳动物受精过程中的种特异性具有潜在作用。

很多用完整ZP3蛋白免疫的哺乳动物在大多数情况下都能产生高的抗ZP3效价，并伴随不育。不过，有关上述研究的报导中也提到了如下一致的结果：表现为紊乱的月经周期的卵巢功能失常、卵巢病理学和各个发育阶段的卵泡的丧失，包括原始卵泡的丧失(例如，Skinner等，Endocrinology，115：2418-2432，1984；Upadhyay等，Biol.Reprod.41：665-673，1989；Sehgal等，Pathology 21：105-110，1989；Dunbar等，Fert.Ster.52：311-318，1989；Jones等，J.Reprod.Fert.95：513～525，1992；Mahi-Brown等，J.Reprod.Immunol.21：29-46，1992；Paterson等，Biol.Reprod.46：523-534，1992)。这种功能失常会导致永久性不育。尤其是对人体来说，这是一种极为槽糕的副作用，因为基于ZP3的疫苗的免疫避孕作用只需用于控制受精，因此，所诱发的不育性最好是能够自动地或通过操作的方式恢复正常。因此，完整的ZP3不适用于开发安全的避孕药。