[发明专利]与主要组织相容性复合体I类重链表达负调节有关的人巨细胞病毒基因的鉴定

说明书

发明领域

本发明涉及感染后不会负调节细胞MHC I类重链表达的重组突变体人巨细胞病毒(HCMV)以及鉴别两种足以造成这种负调节的人巨细胞病毒基因产物。

发明背景

人巨细胞病毒(HCMV)是一种β疱疹病毒，它会在免疫减弱和免疫抑制的成人、以及在子宫中或在围产期被感染的婴儿中引起严重的临床疾病(Alford和Britt，1990)。在人巨细胞病毒(HCMV)感染的细胞中，细胞主要组织相容性复合体(MHC)I类重链的表达被负调节。230-kb的HCMV双链DNA基因组已测序(Chee等，1990)，它至少具有200个可读框架(ORFs)。这200个基因中大多数的功能还不知道。出于本申请的目的，可读框架定义为某基因的一部分，它编码一串氨基酸因而可能编码某种蛋白质。某些HCMV蛋白因其与其它病毒(尤其是单纯疱疹病毒)或细胞蛋白的同源性，其功能是已知或可预测的。但是，大多数HCMV ORF所编码蛋白的功能是未知的。

为了研究HCMV基因的功能，可构建HCMV缺失突变体以评价其体外生长特性(Jones等，1991；Jones和Muzithras，1992)。出于本申请的目的，缺失突变体定义为缺失了部分野生型病毒基因组的人巨细胞病毒突变体。该方法涉及用一个原核细胞报道基因(通常为β-葡糖苷酸酶，但也可使用鸟苷磷酸核糖转移酶)定点置换诱变选定的HCMV基因。以此方式，重组病毒只有在被置换的病毒基因是非必需基因时才能被分离。

有研究者证明，HCMV感染会导致细胞MHC I类重链的负调节(Browne等，1990；Beersma等，1993；Yamashita等，1993)。出于本申请的目的，负调节定义为MHC I类重链的合成、稳定性或表面表达的下降。对其它DNA病毒也报道过此类现象，例如腺病毒、鼠巨细胞病毒和单纯疱疹病毒(Anderson等，1985；Burget和Kvist，1985；del Val等，1989；Campbell等，1992；Campbell和Slater，1994；York等，1994)。在腺病毒和单纯疱疹病毒系统中，体外复制非必需的病毒基因的产物足以引起MHC I类重链的负调节(Anderson等，1985；Burget和Kvist，1985)。还未鉴定出与鼠巨细胞病毒负调节有关的基因。

发明概述

本发明提供了一种重组突变体人巨细胞病毒，它不会在感染后负调节细胞MHC I类重链的表达。在重组巨细胞(HCMV)突变体中含有可读框架US2的基因组区域被缺失。

本发明还提供了一种在感染了巨细胞病毒的细胞中调控主要组织相容性复合体(HMC)I类表达负调节的方法，该方法使用重组突变体人巨细胞病毒。

本发明还提供了使用重组突变体人巨细胞病毒的疫苗，以及采用重组的突变体人巨细胞病毒使个体对巨细胞病毒免疫的方法。缺失了可读框架US2基因区域的活减毒HCMV疫苗能够引起优于含此基因区域的疫苗的免疫应答，因为前者不引起I类的负调节。所以，缺失了此区域的病毒是有利的免疫原。

本发明还提供了通过施用免疫原性量的重组突变体人巨细胞病毒来预防或降低个体对急性巨细胞病毒易感性的方法。

本发明还提供了一种基因治疗载体，其中，涉及MHC I类重链负调节的HCMV基因的US2可读框架可整合入腺病毒载体或类似的以病毒为基础的基因治疗载体中，以尽可能减弱免疫应答。这将允许使用重组的腺病毒或类似的以病毒为基础的用于基因治疗的基因治疗载体。

参照以下附图将能够更充分地理解本发明。

附图说明