[发明专利]多表位疫苗

说明书

本发明涉及含多个细胞毒T淋巴细胞表位的疫苗，本发明还涉及包括多个细胞毒T淋巴细胞表位的编码序列的多核苷酸。

CD8+αβ细胞毒T淋巴细胞(CTL)识别与I类主要组织相容复合物¹(MHC)的特异等位基因相关联的短肽(表位，一般长度8-10氨基酸)。这些肽表位主要是通过一种被认为是涉及多催化性蛋白体复合物的蛋白水解过程^2-7，由胞液蛋白所产生的。适当长度的肽被转运到内质网中，在内质网中特定的表位与MHC相联。然后MHC/表位复合物被转运到细胞表面供CTL识别。关于CTL表位旁侧的序列对这些表位的蛋白水解加工的影响尚存争议^8-12。然而，通过构建编码含9种CD8 CTL表位的人工多肽蛋白的重组痘病毒，本发明人已确定天然位于CTL表位旁侧的序列不为I类加工所必需，即在多表位蛋白中的每一种表位总能通过自身多表位疫苗感染的靶细胞被有效地加工并呈递给相应的CTL克隆。

因此，本发明的首要方面是一种重组多表位细胞毒T淋巴细胞疫苗。该疫苗包括一种重组蛋白，所述重组蛋白包括来自一种或多种病原体的多个细胞毒T淋巴细胞表位，其中所述的至少一种重组蛋白基本上不含天然存在于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的序列。

优选的是，至少一种重组蛋白不含任何天然存在于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的序列。然而，应理解的是天然位于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的短序列(例如，1-5个氨基酸)可能被包括在内。术语“基本上不含天然存在于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的序列”应被认为包括这样的短旁侧序列。

本发明的第二个方面是一种多核苷酸，它包括至少一种编码来自一或多种病原体的多个细胞毒T淋巴细胞表位的序列，其中所述的至少一种序列基本上不含编码天然存在于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的肽的序列。

同样，术语“基本上不含编码天然存在于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的肽的序列”应理解为有可能包括天然位于细胞毒T淋巴细胞表位旁侧的短肽(1-5个氨基酸)编码序列。

本发明的第三个方面为核酸疫苗，该疫苗包括本发明第二个方面所涉及的多核苷酸及一种可接受的载体。

本发明的第四个方面为疫苗配制品，该疫苗包括本发明第一个方面所涉及的重组蛋白及一种可接受的载体和/或佐剂。

在本发明的一个优选的实施方案中，所述的至少一种重组蛋白包括至少三种细胞毒T淋巴细胞表位，所述的至少一种序列编码至少三种细胞毒T淋巴细胞表位。

在另一个的优选实施方案中，表位来自多种病原体。

还应看到的是，本发明的疫苗可以包括免疫调节化合物(如细胞因子)，其它蛋白/化合物(如melittin或调节蛋白)和/或佐剂。该疫苗还可以包括辅助表位/CD4表位和蛋白，B细胞表位，或含有这类表位的蛋白，如破伤风毒素。本发明的疫苗的另一个例子包括一重组疫苗的构建物，其中含CTL表位的多表位连在含B细胞和/或CD4表位的胞外糖蛋白上。

本发明的疫苗可由各种载体，如痘病毒载体、禽痘病毒载体、细菌载体、病毒样颗粒(VLP’s)和棒状病毒载体来输送，或通过核酸接种技术来输送。由于多表位蛋白在制备中和/或注射后在血清中很容易对蛋白水解敏感，我们认为这种疫苗最好采用核酸接种技术¹²、或采用保护多表位蛋白不受蛋白水解作用的载体系统或佐剂系统输送。关于载体的其它资料可参见Chatfield等，疫苗，7，495-499，1989；Taylor等，疫苗，13，539-549，1995；Hodgson，细菌疫苗载体，《农业疫苗》。

本发明的多表位疫苗还可包括来自一种病原体的大量表位(如10个或更多)，以便靶种群HLA多样性也包括在内。例如含受HLA A1、A2、A3、A11和A24限制的表位的疫苗可以包括大约90％的高加索种群。

本发明的多表位疫苗还可由受单个HLA等位基因限制的多个表位来构建。

在本发明的第四个方面的优选实施方案中，疫苗配制品包括ISCOMs，关于ISCOMs的资料可参见澳大利亚专利558258，EP019942，US4578269和US4744983，这些公开的专利在此附上供参考。

为了使本发明的性质得到更清楚的理解，现根据下面的实施例和附图对本发明的优选形式进行描述，其中：

图1：表达编码含有9种CTL表位的多表位蛋白的合成DNA插入物的重组痘病毒的构建。加框的序列表示线性B细胞表位。

图2：重组多表位痘病毒构建物表达的每种表位的CTL识别。