[发明专利]吡咯类在生物活性蛋白溶液中作为杀病毒剂的用途

说明书

总体上说，本发明涉及将生物学活性蛋白质溶液中病毒灭活的方法，具体地讲，涉及使用唑类灭活生物学活性治疗用蛋白质水溶液中病毒。

长期以来已经认识到消灭治疗用产品中病毒感染的重要性。这一点对于来源于人血液或者更进一步说来源于用于制备生物技术产品(例如重组DNA产物和单克隆抗体)的细胞系的生物学活性产品显得尤其正确。

就用于生物学活性蛋白的杀病毒剂而言，重要的目的是确保完满的杀病毒作用而不有害地影响到蛋白质的生物学活性。这些目的要求我们考虑如蛋白质本身，其活性和/或活性位点的特点，杀病毒剂，使用后除去该杀病毒剂的重要性和/或容易程度，以及(灭活)处理本身的可变性如时间，温度和浓度此类可变数。

单独用热处理的办法可用于某些蛋白质的杀病毒处理(例如，在60℃进行的巴斯德灭菌)。但是，在许多情况下仅使用加热处理要避免生物学活性或效用的损失是有困难的。

为了避免仅使用加热处理而产生的某些缺点或活性损失，已经使用或计划用各种各样的化学试剂作为生物学活性蛋白的杀病毒剂。参见例如，M.Dobkin和M.Shearer的美国专利NO.5,071,650，该专利公开了在特定条件下使用酒精。

用于制备病毒疫苗的和更进一步，用于将来源于人血浆中的生物产品制剂中内源病素灭活的非爆发性有机溶剂/去污剂混合物的效用已受到了使用条件(例如PH)的限制。一种用于中性PH值的生物学活性蛋白的杀病毒剂化合物是磷酸三正丁酯(TNBP)。参见例如A.Neurath和B.Horowitz的美国专利NO.4,540,573，该专利公开了使用TNBP灭活脂类包被病毒。还可参见G.Tsay的美国专利N0.5,110,910，该专利公开了在受控的PH，导电性和蛋白质浓度条件下使用TNBP作为杀病毒剂。不幸的是，现行的杀病毒剂通常主要灭活脂类包被的病毒，并且还没有证明这些杀病毒剂对失去脂类包被的更难对付的一类病毒有效。

已将各种各样的吡咯化合物用作为杀真菌剂(例如，参见Hector等人的美国专利NO.5,006,513)，但我们并不知道任何将它们用作为生物学活性蛋白溶液的，尤其是抗不含脂类病毒的杀病毒剂的建议。现在我们已经发现唑类具有一种将水溶液中的包被和非包被病毒灭活，而且保留了蛋白质如免疫球蛋白的生物学活性的特殊能力。下文中详细描述我们的方法。

本发明所述的是将具生物学活性，治疗用蛋白质水溶液中的包被和非包被病毒灭活的方法包括在足以确保从本质上减少两类病毒(每一种病毒降低2或更多log值的病毒效价)而不有害地影响蛋白质的生物学活性(即活性恢复率大于50％以上)的条件下，将该溶液与吡咯接触。在去污剂存在下可加强杀病毒活性。担负灭活作用的主要功能基团是五聚吡咯环，通过改变环结构或将其他功能基团连接到该环上可以调节灭活作用。优选的唑类是咪唑，优选的是使用一种下文中描述的去污剂。

                         实施例

如下文中阐述的，已经证实唑类对包被和非包被病毒都具有杀病毒活性。如本文中使用的，术语吡咯或吡咯类似物或吡咯衍生物是指具有五聚吡咯环的化合物，并且其在不损害有用蛋白质如治疗用蛋白质的生物学活性的温度，PH和浓度的条件下具有杀病毒活性。

化学试剂

所使用的唑类是：咪唑，α-氨基-1H-咪唑-4-丙酸(组氨酸)，2-咪唑啉酮(亚乙基脲)，1H-咪唑-4-乙胺(I4EA)。唑类，去污剂(例如，多乙氧基醚；Triton X-100)，缓冲盐是试剂级并且从Sigma Chemicals，St.Louis，Mo.得到的。

病毒

包被病毒：

水疮性口炎病毒(VSV)，印第安那株，从Finnish RedCross得到，是一种弹犬病毒(RNA)。痘苗病毒，Lederle株，ATCCVR-118，是一种痘病毒(DNA)。Sindbis是一种披盖病毒(RNA)。唇疮疹病毒1型(HSV-1)是一种疮疹病毒(DNA)。

非包被病毒：

脑心肌炎病毒(EMC)是一种鼠细小核糖核酸病毒(RNA)。脊髓灰质炎病毒2型是一种人脊髓灰质炎病毒(RNA)。呼吸道肠道病毒3型是一种呼吸道肠道病毒(RNA)。以前曾报道过病毒的衍生(参见，Lembach，et al.，Current Studies in Hematology andBlood Transfusion.Basel，Karger，1989；56.97-108)。

病毒分析：