[发明专利]单核细胞趋化蛋白-4

说明书

本发明涉及新识别的多核苷酸、由此多核苷酸编码的多肽以及这些多核苷酸和多肽的用途和制备。更具体地说，本发明的多肽是单核细胞趋化蛋白-4(MCP-4)。本发明还涉及抑制这些多肽的作用的方法。

有三种形式的单细胞趋化蛋白，即，MCP-1、MCP-2、MCP-3。所有的这些蛋白均已作了结构和功能上的鉴定，且也已经作了克隆和表达。MCP-1和MCP-2具有吸引白细胞(单核细胞和白细胞)的能力，而MCP-3也具有吸引嗜伊红性粒细胞和T淋巴细胞(Dahinderi，E.等，J.Exp.Med.，179：751-756(1994))的能力。

起初，人单核细胞特异性吸引因子是从神经胶质瘤细胞系和单核细胞细胞系中纯化的(Matsushima，K.等，J.Exp.Med.，169：1485-1490(1989))。此因子是由Matsuhima等最初设计的神经胶质瘤衍生的趋化因子(GDCF)和单核细胞趋化和活化因子(MCAF)。此因子现称作MCP-1。随后克隆的MCP-1的cDNA显示，它与鼠JE基因极其相似。JE基因可以通过血小板衍生的生长因子在鼠纤维瘤中大量诱导(Cochran，B.H.等，Cell 33：939-947(1983))。鼠JE与MCP-1极其相似。MCP-1与鼠JE在68个共有的N-末端残基区有62％相同。JE和MCP-1是种同系物被广泛地接受。本发明的多肽-MCP-4结构和功能上与MCP-1和鼠JE蛋白相关，参见图2。

施用JE/MCP-1来抑制脊椎动物中瘤形成的方法公开于PCT专利申请WO-92/20372中，其中还公开了一种通过施用JE/MCP-1来治疗恶性肿瘤的局部并发病的方法和防治寄生感染的方法。已发现，JE/MCP-1蛋白在恶性肿瘤细胞中的表达抑制了细胞在体内形成肿瘤的能力。

人MCP-1是具有8,700道尔顿的76个氨基酸的碱性肽。MCP-1主要在单核细胞、嗜伊红性粒细胞和纤维瘤细胞中诱导表达(Leonard，E.J.和Yoshimura，T.，Immunol.Today，11：97-101(1990))。诱导这种表达的的因子是IL-1、TNF或脂多糖处理。  

MC-1的其它的性能包括以百日咳毒素方式强烈吸引成熟人嗜碱性粒细胞的能力。MCP-1是能直接诱导由嗜碱性粒细胞释放的组胺的细胞因子(Bischoff，S.C.等，J.Exp.Med.，175：1271-1275(1992))。再者，MCP-1通过用白介素3、白介素5、或粒细胞/巨噬细胞克隆刺激因子预处理的嗜碱性粒细胞来促进白细胞三烯C4的形成。MCP-1诱导的嗜碱性粒细胞介体释放会在变应性发炎和其它表达MCP-1的病理中起重要作用。

具有编码人单核细胞趋化和活化因子(MCAF)的核苷酸序列的克隆揭示了由推定的23个氨基酸残基的信号肽序列和76个氨基酸残基的成熟MCAF序列组成的MCAF多肽的一级结构(Furtani，Y.H.等，Biochem.Res.Commu.，159：249-55(1989))。人神经胶质瘤衍生的单核细胞趋化因子(GDCF-2)的完整氨基酸序列也被测定。此肽吸引人单核细胞，但不吸引嗜中性白细胞。GDCF-2包含76个氨基酸残基是确定的。此肽链含有4个半胱氨酸，在11、12、36和52位上，它产生一对环，群集在二硫键上。再者，MCP-1基因已指定到人染色体17上(Mehrabian，M.R.等，Genomics，9：200-3(1991))。某些数据示意MCP-1的潜在作用是介导动脉壁的单核细胞渗入。单核细胞看来是作为泡沫细胞的祖细胞和介导内膜增生的生长因子动力源两者的动脉粥样化形成机理的中心(Nelken，N.A.等，J.Clin.Invest.，88：1121-7(1991))。也已经发现，MCP-1的滑液产生在与类风湿性关节炎有关的炎症期间的单核巨噬细胞的补充上起重要作用，并且滑液组织巨噬细胞是这种细胞因子的主导来源。已发现，MCP-1含量在来自类风湿关节炎患者的滑液中明显高于来自骨关节炎患者或来自其它关节炎患者的滑液(Koch，A.E.等，J.Clin.Invest.，90：772-9(1992))。

MCP-2和MCP-3归类于前炎症蛋白亚族，并且功能上与MCP-1有关，因为它们特异性地吸引单核细胞，但不吸引嗜中性白细胞(VanDamme，J.Exp.Med.，176：59-65(1992))。MCP-3显示出分别71％和58％同源于MCP-1和MCP-2。MCP-3是调节巨噬功能的炎症细胞因子。

本发明的一个方面是提供新颖的为MCP-4的成熟多肽以及其片段、类似物和衍生物。本发明的多肽是人源的。