[发明专利]封阻补体激活的嵌合蛋白

说明书

本发明领域

本发明涉及补体抑制和炎症。本发明背景

补体系统包括血浆中在免疫和变态反应中起内在作用的一组蛋白质。补体激活可以通过至少两种途径发生：牵涉抗原-抗体复合物的经典途径，牵涉酵母和细菌微生物细胞壁多糖的旁路途径。不管使用哪种起始途径，最终结果是生成激活的补体蛋白质片段(例如C3a、C4a和C5a过敏毒素和C5b-9膜攻击复合体)，这些蛋白质介导了包括白细胞趋化性，巨噬细胞激活，血管渗透性和细胞溶胞作用的几种功能(Frank，M.和Fries，L.Complement.In Paul.W.(ed.)Fundamental Immunology，Raven Press，1989)。

已经鉴定了几种补体系统的调节蛋白(图1)。它们的基本功能是调节防止过量补体激活和宿主组织自溶破坏的C3/C5转化酶的活性。这些补体调节剂或者是可溶血浆蛋白或是在各种细胞类型上表达的膜整合蛋白。前者包括C4b结合蛋白(C4bp)和因子H。后者包括C3b/C4b受体(补体受体1，CR1，CD35)，膜辅因子蛋白(MCP，CD46)，和衰变加速因子(DAF，CD55)。这些蛋白质有许多结构相似性。每种蛋白质由具有长度为大约60个氨基酸的多个短的共有重复片段(SCRs)构成，该SCR具有保守的半胱氨酸、甘氨酸和脯氨酸残基。编码这些蛋白质的基因已经定位在染色体1上并共同被认为是补体激活调节剂(CRA)基因簇(Hourcade，D.et al，1989，Adv.Immunol.45：381)。除了它在调节补体激活中的作用外，红细胞CR1也作为循环免疫复合物的受体而起作用以促进它们从血浆中清除(Cornacoff，J.et al，1983，J.Clin.Invest.71：236)。

MCP和DAF是重要的补体系统调节蛋白，它们通过补体激活防止宿主组织自溶破坏。

MCP最初被Seya和其同事纯化并定性(J.Exp.Med.1986，163：837；Biochem.J.，1989，264：581)；他们证明MCP结合C3b和C4b并具有因子I辅因子活性。因此MCP通过蛋白酶裂解C3bi和C4bi不可逆地失活C3b和C4b而起作用(见图2)。已经证明MCP优选与C3b结合，因此使它成为一个更有潜力的旁路途径转化酶的失活剂(Seya，T etal，1991，Mol.Immunol 28：1137)。

DAF首先被Ni Cholson-Weller和同事鉴定(J.Immunol.，1982，129：184)并且被Medof和同事定性(J.Exp.Med.，1984，160：1558)。DAP也与C3b和C4b结合并从C3转化酶中解离这些分子而起作用，因此促进转化酶的衰变(失活作用)(见图3)。相似地，DAF失活旁路和经典转化酶。

MCP和DAF只由4个SCRs组成，使其成为最小的补体调节蛋白质。

MCP不具有衰变加速活性而DAF不具有辅因子活性。两种蛋白质在多种细胞类型中被表达包括内皮细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、粒细胞和单核细胞(Hourcade，D.et al，1989，Adv.Immunol.45：381；McNearny，T.et al，1989，J.Clin，Invest，84：538)。MCP和DAF被认为通过不同补体机制，作为防止补体介导的宿主细胞自溶的补体激活内在抑制剂起作用。本发明概要

本发明涉及一种嵌合蛋白，其中抑制补体激活的第一多肽与抑制补体激活的第二多肽连接。这种嵌合蛋白优选为一种可溶蛋白。嵌合的第一多肽和第二多肽可以相同或不同，并且第一多肽可以通过肽键与第二多肽连接。

在一优选实施例中，第一多肽是MCP或其可溶性生物活性片段，例如含有至少MCP的SCR的2、3和4个区的片段。而第二多肽是DAF或其可溶性生物活性片段，例如含有至少DAF的SCR的2、3和4个区的片段。当这里使用的术语“片段”应用于多肽时，一般长度是至少大约5个连续的氨基酸，典型地是至少大约10个连续的氨基酸，更典型地是至少大约20个连续的氨基酸。通常是至少大约30个连续的氨基酸，优选至少大约40个连续的氨基酸，更优选至少大约50个连续的氨基酸，且最优选至少大约60至80或更多的连续的氨基酸。这种肽可以用本领域熟练技术人员公知的方法制备，包括蛋白质的蛋白酶裂解，片段的从头合成或基因工程。一个生物活性片段被定义为具有补体抑制活性的片段。片段的活性应该至少是天然存在的补体激活抑制剂的生物活性的1％，更优选是至少10％，但更优选至少50％，最优选至少相等。