[发明专利]一种筛选利用膜分子gp130激活细胞生理调节机制的激素的拮抗剂和超拮抗剂的方法

权利要求书

1.一种筛选利用膜分子gp130激活细胞生理调节机制的激素的拮抗剂和超拮抗剂的方法，它包括以下操作步骤：

-将生长激素的氨基酸序列与所述激素的氨基酸序列进行比较；

-将生长激素受体的氨基酸序列与所述激素的两种受体，即激素专一性受体和gp130的氨基酸序列相比较；

-在上述比较的基础上，根据生长激素受体和所述的两种激素受体序列之间的功能相似性，构建受体复合物的三维模型；

-对分别构成与专一性受体反应的位点和与gp130反应的位点的一部分的野生型所述激素的残基进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的筛选利用膜分子gp130的激素的拮抗剂和超拮抗剂的方法，其中所研究的激素选自白细胞介素6、制癌蛋白M、白血病抑制因子、睫亲神经因子和白细胞介素11。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所研究的激素为白细胞介素6，它进一步包括下列附加步骤用于筛选白细胞介素6的拮抗剂：

-利用常规分子生物学技术对权利要求1中所鉴定的残基进行诱变，形成与gp130反应的位点的一部分(Arg30，Tyr31，Gly35，Ser37，Ala38，Ser118，Lys120，Val121，Gln124，Phe125，Gln127，Lys128和Lys129)；

-评估上面所产生的突变体的生物活性和与专一性白细胞介素6受体的亲和性，以鉴定其与专一受体的亲和性完整且生物活性降低或丧失的白细胞介素6的变异体；

-对作为拮抗剂的上述白细胞介素6变异体的野生型白细胞介素6生物活性进行评估。

4.根据权利要求2或3所述的方法，它是通过将上面所述的负责拮抗活性的氨基酸序列的改变与负责提高白细胞介素6的专一受体亲和性的氨基酸的改变相结合筛选白细胞介素6的超拮抗剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其中上面所鉴定的残基的诱变是通过采用选自聚合酶链反应、引物延长、寡核酸针对性诱变及其组合的分子生物学技术完成。