[发明专利]α-淀粉酶同工酶活性的差示测定法

权利要求书

1、一种α-淀粉酶同工酶活性的差示测定法，该方法是利用通过将用于测定α-淀粉酶活性的底物与样品反应而得到的α-淀粉酶活性测定值和通过将同样的底物与样品在抑制剂存在下反应而得到的α-淀粉酶活性测定值，该抑制剂对两种α-淀粉酶同工酶具有不同的抑制常数，该方法包括用下式所示的6³-脱氧麦芽三糖[O-6-脱氧-α-D-吡喃葡糖基-(1→4)-O-α-D-吡喃葡糖基-(1→4)-D-葡萄糖]作为抑制剂：

2、根据权利要求1的方法，其中所说的α-淀粉酶是人α-淀粉酶，两种α-淀粉酶同工酶是衍生于胰液的α-淀粉酶和衍生于唾液腺的α-淀粉酶。

3、根据权利要求2的方法，其中式（Ⅰ）所示的6³-脱氧麦芽三糖在α-淀粉酶活性测定体系中的浓度为0.01-10mM。

4、根据权利要求1的方法，其中所说的差示测定法是双动力学法或双道法。

5、根据权利要求1的方法，其中所说的用于测定α-淀粉酶活性的底物是下列通式所示的麦芽低聚糖衍生物：

其中R代表氢原子，芳香生色基团或除葡萄糖之外的糖基，R¹和R²可以是相同的或不同的，代表卤原子，羟基，叠氮基，酰氧基，烷氧基，芳氧基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，烷基巯基，芳基巯基，N-烷基氨基甲酰氧基，N-芳基氨基甲酰氧基，烷氧甲氧基或芳氧甲氧基，或R¹和R²一起形成取代的或未取代的亚甲基二氧基，n表示1-6的整数。

6、根据权利要求5的方法，其中所说的通式（Ⅱ）所示的麦芽低聚糖衍生物是麦芽五糖，麦芽七糖，2-氯-4-硝基苯基β-D-麦芽五糖苷，2-氯-4-硝基苯基4⁵，6⁵-二-O-（N-乙基）氨基甲酰-β-D-麦芽五糖苷，2-氯-4-硝基苯基4⁵，6⁵-二-O-甲氧甲基-β-D-麦芽五糖苷，2-氯-4-硝基苯基6⁵-叠氮基-6⁵-脱氧-β-D-麦芽五糖苷，2-氯-4-硝基苯基6⁷-氯-6⁷-脱氧-β-D-麦芽七糖苷，2-氯-4-硝基苯基α-D-麦芽三糖苷，4-硝基苯基6⁵-O-苄基-α-D-麦芽五糖苷，2-氯-4-硝基苯基4⁵，6⁵-O-亚苄基-β-D-麦芽五糖苷，酚靛-3'-氯苯基6⁵-O-甲苯磺酰-β-D-麦芽五糖苷，6⁵-氯-6⁵-脱氧-D-麦芽五糖或1-（4⁶-O，6⁶-O-二甲磺酰-α-麦芽六糖基）-α-D-葡糖醇。

7、根据权利要求6的方法，其中所说的通式（Ⅱ）所示的麦芽低聚糖衍生物是2-氯-4-硝基苯基6⁵-叠氮基-6⁵-脱氧-β-D-麦芽五糖苷或2-氯-4-硝基苯基β-D-麦芽五糖苷。

8、根据权利要求5的方法，其中衍生于人胰液的α-淀粉酶和衍生于人唾液腺的α-淀粉酶之间的反应速率与所说的底物之比为0.6或更大。