[发明专利]一种制备腺嘌呤核苷二磷酸和胞嘧啶核苷二磷酸的方法

权利要求书

1、一种制备腺嘌呤核苷二磷酸的方法，其特征是将啤酒酵母预处理后制成含磷和不含磷两种酶液，将腺嘌呤核苷一磷酸在含磷酶液的作用下转化为腺嘌呤核苷三磷酸并将纯化、浓缩、干燥，用不含磷酶液和腺嘌呤核苷三磷酸按重量浓度为70-90%酶液、10-30%核苷三磷酸配成水溶液，在此水溶液中按重量浓度分别加入0.2-0.7%的镁盐和5-20%的葡萄糖，在28-39℃、PH6-7.5的条件下反应1-3.5小时，得到的反应液经纯化、浓缩、干燥即为腺嘌呤核苷二磷酸。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述啤酒酵母预处理是将啤酒中生产中经过培养七、八代的菌株或陶汰酵母用蒸馏水或去离子水洗2-3次，自然沉淀或离心至少10分钟，得到的酵母泥在0℃-10℃下保存。

3、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含磷酶液是按重量尝试分别加入葡萄糖10%，磷酸3%，镁盐0.5%，酵母36%配成水溶液后，将PH调到7，在28℃下发酵6小时，用2000转/分的速度离心10分钟，得到的清液为含磷酶液。

4、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述不含磷酶液是按重量浓度分别加入葡萄糖10%，镁盐0.5%，酵母36%配成水溶液后，将PH调到7，在28℃下发酵6小时，用2000转/分的速度离心10分钟，得到的清液为不含磷酶液。

5、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的将腺嘌呤核苷-磷酸转化为腺嘌呤核苷三磷酸是这样进行的：将腺嘌呤核苷-磷酸配成10%的水溶液，并按10%腺嘌呤核苷一磷酸水溶液：含磷酶液＝1∶10的比例，在PH为7、28℃下反应3.5小时。

6、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的纯化过程是将反应液的PH调至中性在100℃下加热1分钟后，冷却，离心（3000-5000转/分）15分钟，或用一层滤纸铺硅藻土过滤，滤液用水稀释3倍，用氢氧化铵调PH到8-8.5，上到聚苯乙烯二乙烯苯季胺型阴柱上进行分离，用0.01N盐酸洗脱后，再用0.01N盐酸且含0.04N氯化钠水溶液洗脱，再用0.2-0.7M氯化钠洗脱，得到有用的洗脱液（ATP或ADP）。

7、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述浓缩干燥过程是将有用的洗脱液用水稀释3倍，用氢氧化铵将PH调到8-8.5，充分上满聚苯乙烯二乙烯苯季胺型阴柱，用0.01N盐酸以及0.01N盐酸且含0.6-1M氯化钠溶液洗脱，洗脱液用6N氢氧化钠将其PH调到3.8，加三倍体积的95%的乙醇，冷置过夜，倾去上部乙醇，沉淀分别用75%乙醇，无水乙醇无水乙醚脱去水份，并用五氧化二磷真空干燥。

8、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的镁盐是氯化镁或硫酸镁。

9、一种制备胞嘧啶核苷二磷酸的方法，其特征是将啤酒酵母预处理后制成含磷和不含磷两种酶液，将胞嘧啶核苷一磷酸在含磷酶液的作用下转化为胞嘧啶核苷三磷酸并将其纯化、浓缩干燥，用不含磷酶液和胞嘧啶核苷三磷酸按重量浓度为70-90%不含磷酶液、10-30%胞嘧啶核苷三磷酸配成水溶液，在此水溶液中按重量浓度分别加入0.2-0.7%的镁盐和5-20%的葡萄糖，在28-30℃、PH为6-7.5的条件下反应1-3.5小时，得到的反应液经纯化、浓缩、干燥即为胞嘧啶核苷二磷酸。

10、如权利要求9所述的方法，其特征在于所述啤酒酵母预处理是将啤酒生产中经过培养七、八代的菌株或陶汰酵母用蒸馏水或去离子水洗2-3次，自然沉淀或离心至少10分钟，得到的酵母泥在0℃-10℃下保存。

11、如权利要求9所述的方法，其特征在于所述含磷酶液是按重量浓度分别加入葡萄糖10%，磷酸3%，镁盐0.5%，酵母36%配成水溶液后，将PH调到7，在28℃下发酵6小时，用2000转、分的速度离心10分钟，得到的清液为含磷酶液。

12、如权利要求9所述的方法，其特征在于所述不含磷酶液是按重量浓度分别加入葡萄糖10%，镁盐0.5%，酵母36%配成水溶液后，将PH调到7，在28℃下发酵6小时，用2000转/分的速度离心10分钟，得到的清液为不含磷酶液。