[发明专利]狨透明带蛋质ZP3

说明书

本发明涉及具有狨ZP3序列或其部分序列的多肽。本发明还涉及抗这种多肽的抗体和疫苗，或用这种多肽或抗体诊断和作为开发人避孕剂的模型的狨ZP3多肽的应用。

在授精过程中，精液细胞与雌性配子周围透明带（ZP）上的种特异性受体的键合作为媒介引起哺乳纲配子间的首次相互作用。ZP是一种细胞外基质，包括三种糖蛋白，以ZP1，ZP2，ZP3表示，其中ZP3被确定为精液受体（reviewed    in    Wassarman，Development    108，1-17;1990）。

大量应用猪和鼠的ZP蛋白质两者的体外和体内的研究表面ZP3，在发展免疫避孕法的实验策略中，是一种重要的预定目标抗原（Paterson    and    Aitken，Curr    Opinion    in    Immunol.，2，743-747，1990），最近为了达到此目的进行了一个重要步骤，通过筛选鼠卵巢cDNA表达文库，对鼠ZP3    cDNA克隆和品质鉴定（Ringuette等人，Develop    mental    Biology    127，，287-295，1988）。其后已经阐明了大田鼠和人ZP3序列（Chamberlin，M.E.和Dean，J.，Proc.Natl.Acad.Sci    VSA，87，6014-6018，1990和Kinloch等人，Developm，Biol..142，414-421，1990）。

通过鼠ZP3氨基酸序列衍生的寡肽接种雌鼠导致长期不孕症的研究，强调了ZP₃避孕的可能性（Millar等人.，Science246，935-938，1989）。

然而为了开发以重组ZP3多肽或其部分序列为基础的人避孕剂疫苗，仍需要实验体系。鼠不适于这样的实验体系，因为鼠和人两个种，与妊娠有关的分子之间的生理差异太大。这可通过鼠和人ZP3序列同系物相对缺乏（67%）来证实。因此本发明的目的在于探索一个与人的妊娠有关的分子紧密相似的实验体系。

现在我们已经成功地分离出狨ZP3的基因编码并阐明了其核甘酸序列。这种核甘酸序列编码了一种具有狨ZP3活性的多肽，所述多肽由SEQ    ID    NO：1的氨基酸序列构成。本发明还包括根据本发明多肽的片段，条件是所述片段由特定狨ZP3氨基酸序列构成。这种特定的氨基酸序列至少与狨ZP3中的特定氨基酸及它们的侧区相对应，所述特定氨基酸在例如下面的SEQ    ID    NO：1氨基酸序列中的位置为，位26，32，38，39，43，52，54，63，69，77，84，145，182，183，187，195，252，253，257，305，323，333，340，342，343，345，347，348，371，376，377，383，387，388，392，398，399，或418。

狨ZP3活性包括精子结合活性，该活性可用结合分析测定。狨ZP3活性还包括狨ZP3的抗原性。根据本发明的多肽是纯化和分离了的多肽。为此目的的分离意为从其它狨蛋白质中分离出来。

术语“多肽”是指氨基酸的分子链，而不是指产物的特定长度，并且如果需要可以在体内或体外进行改性，例如可以通过糖基化，酰胺化，羧化或磷酸化作用;因此在本发明多肽的定义内尤其包括多肽，寡肽和蛋白质。

根据本发明多肽或其片段的术语“避孕剂抗原性”是指产生ZP3蛋白质抗体可因此干扰精子-卵母细胞相互作用，从而防止妊娠的所述多肽或片段的抗原性。

令人惊奇地发现本发明多肽与人ZP3初级氨基酸序列显示了高同源性（91%在初级氨基酸序列）。本发明多肽与人ZP3的这种同源性使得狨ZP3成为建立开发人ZP3基础上的人避孕疫苗实验体系的理想的候选策略。发现在狨体中的本发明多肽或其片段的避孕抗原剂将高程度地预示其相应同系物人体ZP3或其片段的避孕抗原性。在此采用相似体系也是指词组“狨ZP3体系”。显然如果使用自体同源的狨多肽，关于ZP3的狨相似体系只能优选指相应人的体系。而在狨体中使用人ZP3则不是这种情况。

并且，根据它们与人ZP3高程度的同源性，本发明多肽适于作为人疫苗的预定目标。可假设这些多肽具有与相应人多肽相同的抗原性，但它们具有增强的免疫原，同时它们对于人体免疫系统来说是狨特有的即“外来的”。这样的增强的免疫性将减少有效疫苗的需要量。

可以通过合成或重组DNA技术两者之一合成本发明多肽。制备合成的多肽的方法是本领域公知的，不需要再进行任何详细阐述。