[发明专利]新的可溶性补体受体I的糖型

说明书

本发明涉及可溶性补体受体1型（sCR1）的新的糖型（glycoform），及其在补体活性相关疾病和各种炎性以及免疫性疾病的诊断和治疗中的应用。本发明也提供该糖型的生产，检测和提纯方法。

补体系统

构成正常血清中约10%球蛋白的补体系统由许多不同蛋白组成，这些蛋白在免疫系统对外来抗原的应答方面是很重要的。当补体系统的初级成份分裂，而分裂的碎片单独的或者同其它蛋白一起激活另外的补体蛋白时，结果引起连锁蛋白溶解反应，于是便使补体系统激活。补体系统激活导致血管通透性增加，吞噬细胞趋化性、炎性细胞激活，外来颗粒受调理素影响，直接杀死细胞以及损伤组织。补体系统激活可由抗原-抗体复合物（经典途径）启动，或者例如由病原体细菌细胞壁上存在的脂多糖引发（替代途径）。

膜结合补体受体1型

补体受体1型（CR1）存在于红细胞、单核细胞/巨噬细胞，粒细胞、B细胞、某些T细胞、脾滤泡树突细胞以及肾小球足状突细胞的膜上。CR1可与补体成份C3b和C4b结合，并被称之为C3b/C4b受体。CR1的结构组织和初级序列是已知的（Klickstein  等人，1987，J.Exp.Med.165∶1095-1112;Klickstein等人，1988，J.Exp.Med.168∶1699-1717;Hourcade等人，1988，J.Exp.Med.168∶1255-1270）。它由含60-70个氨基酸的30个短的一致重复链（SCRs）组成，每个SCR中，平均65个氨基酸中的29个保持不变。推断出各SCR均通过二硫键形成三维三环结构，其中第3和第1半胱氨酸以及第4和第2半胱氨酸连于二硫键中。CR1进一步排列成各由7个SCRs组成的4个长的同源重复链（LHRs）。在引导序列（转译后除去）后，CR1分子由含C4b结合区的N-最末端LHR-A、含C3b结合区的两个重复键LHR-B和LHR-C以及C最末端的LHRD组成，其后接有2个其它SCRs，一个是25残基的推测横跨膜区和一个是43残基的细胞质尾。

CR1系蛋白质超科中一员，以该SCR同源性为特征。有C3/C4结合功能的某些超科成员包括CR2、C4结合蛋白、H因子、B因子和C2，而缺乏该功能的蛋白质包括白细胞介素-2受体、β₂-糖蛋白I、Clr，结合珠蛋白α链以及ⅩⅢb因子。

CR1被认为是糖蛋白，其推断氨基酸序列有用于胞外区N-连接糖基化作用（氨基酸一致序列NXS或NXT）的25个潜在位点。据载这些可利用的位点只有6-8个连接到低聚糖上（Sim，1985，Biochem.J.232∶883）。CR1的非糖基化形式于衣霉素存在下产生，表现出连接iC3能力降低（Lublin等人，1986，J.Biol.Chem.261∶5736），看来糖蛋白N-末端被阻隔了。

目前为止，已鉴定出四种不同CR1等位基因型或异型，其大小上有30-50KDa增量之别。在人群中，这些异型的基因频率各不相同（Holer  等人，1987，Proc.Natl.Acad.Sci.USA84∶2459-2463）。F（或A）异型由4个LHR组成，其分子量约为250KDa;较大的S（或B）异型分子量约为290KDa，含有系LHR-B的5′半和LHR-A3′半嵌合体的第5LHR，预测它有第3个C3b连接位点（Wong等人，1989，J.Exp.Med.169∶847）。最小的F′（或C）异型（最大可能是由于LHR-B和一个C3b结合位点的缺失引起的）在全身性红斑狼疮（SLE）病人中含量增加（Van  Dyne等人，1987，Clin.exp.Immunol.68∶570;Dykman  等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA80∶1698）。

可溶性补体受体1型