[发明专利]狂犬疫苗特异性免疫增强剂的制备方法

说明书

本发明涉及到一种生物药品的制备方法，特别是一种狂犬疫苗特异性免疫增强剂的制备方法。

人类感染狂犬病毒后一旦发病，死亡率则为100%。目前，唯一有效的是注射狂犬病疫苗和抗狂犬病血清，抗狂犬病血清能延长狂犬病发病潜伏期，给疫苗的自动免疫创造条件，但不能完全保护发狂犬病，而狂犬病疫苗也没有100%的保护率。根据有关已接种疫苗后仍然发病的例子进行分析的报导，潜伏期＜30天的占66.2%，免疫后抗体阳性率50%，仍有50%为免疫空白，抗体阴性的接种人群仍潜伏着高度发病的危险性。这类人群可能是与肌体免疫功能失调有关。

本发明的目的是提供一种新的技术制备狂犬病特异性猪脾转移因子（PSR.V-TF），用来调节机体免疫功能，配合狂犬病疫苗以促使机体尽早产生抗体，提高抗体阳性率，减少死亡率。

本发明的技术解决方案是这样的：选用猪作免疫动物，将狂犬病疫苗注入猪体内一段时间后，采血样测定其效力单位，当达到10^u/ml以上后宰杀，收集脾脏置低温保存备用。制作时，将脾脏用生理盐水清洗干净，将其切碎置于高速组织搅拌机中加等量灭菌生理盐水搅拌，然后采用冻融法制备出狂犬疫苗特异性免疫增强剂。

其详细制作过程如下：

a、猪免疫狂犬病疫苗：选择健康猪作免疫动物，猪的重量在50kg左右为最佳，先抽血检测出有先天狂犬抗体及HBsAg等阴性的猪进行免疫狂犬病疫苗，抗原为组织培养人用狂犬病疫苗，免疫程序参照WHO的免疫程序（0、3、7、15、21、30天），共6针，每针肌注4ml。间隔两个月后加强免疫3针（0、7、14天），即每针相隔7天，每针4ml。加强免疫20天后采血样，按中国药品生物制品检定所《人用精制抗犬病血清国际单位检定方法》测定效力单位，达到10^u/ml以上后宰杀收集脾脏置低温保存备用。

b、狂犬疫苗特异性免疫增强剂的制作：将收集的脾脏除去脂肪包膜及结缔组织等，用生理盐水洗2～3次，然后将脾脏切碎置于高速组织搅拌机中，加等量灭菌生理盐水搅拌3分钟，取出置于密封容器中，置于-15～-20℃速冻箱中速冻，然后取出在常温下解融，解融后再置于-15～-20℃的速冻箱中速冻，然后又取出在常温下解融，如此反复八次，然后再装入无菌透析袋中，加适量灭菌生理盐水，放置于4℃冰箱内透析24小时，倾出透析液，如此反复透析3次，合并三次透析液，经玻璃滤器过滤除菌后，在无菌的条件下定量灌入经180℃干烤4小时的无菌安瓶内，经低温冷冻干燥后封口。

狂犬病特异性猪脾转移因子（即PSR.V-TF）检测结果