[发明专利]编码BSSL/CEL的DNA分子

说明书

本发明涉及包含内含子序列并编码根据作用位点而称之为胆汁盐刺激的脂酶(BSSL)或羧酸酶脂酶(CEL)的人蛋白质的DNA分子。用该DNA分子有助于生产重组人BSSL/CEL，尤其是通过用转基因非人哺乳动物进行生产。可以将该重组人BSSL/CEL作为可取代人奶喂养婴幼儿的婴幼儿食品的组分，或将其用于生产抗如：脂肪吸收障碍，囊性纤维性交和慢性胰炎的药物。食物脂类的水解

食物中的脂类是能量的一个重要来源。富含能量的三酰基甘油占这些脂类的95％以上。一些脂类，如特定的脂肪酸和脂溶性维生素是饮食中必需的成分。在胃肠道吸收前，三酰基甘油以及微量成分，即酯化的脂溶性维生素和胆固醇，以及二酰基磷脂酰甘油需要水解酯键以得到疏水性较低的可吸收产物，这些反应由称之为脂酶的一组特定酶催化。

在成人中，据认为涉及的必需脂酶是胃脂肪酶，胰辅脂酶依赖的脂酶(水解三和二酰基甘油)，胰磷脂酶A2(水解二酰基磷脂酰甘油)以及羧酸酯脂酶(CEL)(水解胆甾烯基和脂溶性维生素酯类)。在哺乳喂养的新生儿中，胆汁盐刺激的脂酶(BSSL)在上述几种脂类的水解中起必不可少的作用。脂类消化的产物与胆汁盐一起形成可开始吸收的混合微胶粒。胆汁盐刺激的酯酶

喂奶的人的乳腺合成并与奶一起分泌胆汁盐刺激的脂酶(BSSL)(B1ckberg et al.,1987)，在由一级胆汁盐特定激活后，该酶对哺乳喂养婴儿的内源性肠内脂肪消化能力产生影响。占全部奶蛋白质总量约1％的这种酶(Blckberg&Hernell,1981)在与奶一起通过胃时并不减少，在十二指肠的内含物中，经胰蛋白酶如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶失活成胆汁盐以保护该酶。但当奶经巴氏灭菌，如加热至62.5℃,30分钟可使其失活(Bjrksten et al.,1980)。

体外模式实验表明，在BSSL存在的情况下，三酰基甘油消化的终产物不同(Bernbck et al.,1990；Hernell & Blckberg,1982)。这可能是由于新生儿期间，较低的管腔内胆汁盐浓度有利于产物吸收。羧酸酯脂酶

人胰液中的羧酸酯脂酶(CEL)(Lombardo et al,1978)似乎与BSSL功能相同，或者至少很相似(Blckberg et al,1981)。它们具有共同的抗原决定簇，有相同的N末端氨基酸序列(Abouakilet al.,1988)，并由丝氨酸酯酶的抑制剂，如毒扁豆碱及二异丙基氟磷酸酯抑制。最近几个实验室的研究中对奶脂酶及胰脂酶的cDNA结构进行了定性(Baba et al.,1991；Hui et al.,1991；Nilsson et al.,1990；Reue et al.,1991)并且得出的结论是奶酶与胰酶是相同基因的产物(在本申请中涉及CEL基团，EC3.1.1.1)。在WO 91/15234(Oklahoma MedicalResearch Foundation)和WO 91/18923(AktiebolagetAstra)中描述了CEL基因的cDNA序列及推断的氨基酸序列。

因此认为CEL与BSSL相同，且由CEL基因编码的多肽在本发明说明书中称为BSSL/CEL。脂类吸收障碍

脂类吸收障碍，并由此产生营养不良的普通原因是管腔内胰辅脂酶依赖的脂酶和/或胆汁盐水平降低。脂酶缺陷的典型例子是患有囊性纤维性变和慢性胰炎的患者，80％囊性纤维性交的患者是普通的遗传无序导致终身缺陷，慢性胰炎经常起因于慢性酒精中毒。

患有胰脂酶缺陷的患者目前的治疗是口服很大剂量的猪胰酶粗制剂。但是在胃中，低PH值使辅酶依赖性胰脂酶失活。而使用大剂量的酶并不能完全克服这种影响。因此，对于大多数患者来说，口服大剂量是不合适的，此外，该制剂不纯并且味道不好。

已经制成可通过胃酸区域并仅在空肠的相对碱环境中释放酶的特定片剂。然而，许多胰不正常的患者有一副不正常的酸性空肠，因而在这种情况下，片剂不可能释放出酶。

此外，由于目前市场上的制品不是来源于人，因而有免疫反应的危险，这种免疫反应可能对患者有不良影响或者导致治疗效果减弱。现有制剂的另一缺点是没有说明其内含物中除辅脂酶依赖性脂酶外其他脂解活性。事实上，这些制剂大多数包含有很低的BSSL/CEL活性水平。这可能是尽管进行补充治疗，但许多患囊性纤维性变的患者仍患有脂溶性维生素和必需的脂肪酸缺陷症的一个原因。