[发明专利]抗肿瘤的脑啡肽-干扰素融合蛋白及其制法

权利要求书

1、一种具有高效抗肿瘤功能的脑啡肽-干扰素融合蛋白，其特征在于：氨基端的脑啡肽部分和羧基端的干扰素部分，两者由中间连接肽三肽(Ser-Gly-Ser)相连，总分子量为21KD。

2、一种具有高效抗肿瘤功能的脑啡肽-干扰素融合蛋白的制备方法，其特征在于：

（ⅰ）脑啡肽基因和连接肽基因的合成，是在通用的DNA自动合成仪上采用亚磷酰胺法化学合成，合成片段的结构设计为TCGACATGTACGGTGGCTTTATGTCCGGATCCTGCGACCTGC，其中已包括脑啡肽和连接肽的编码区。

（ⅱ）干扰素基因的分离，采用冷冻匀浆及蛋白酶从人的胎肝中提取染色体DNA作为模板进行聚合酶链式反应，扩增出人的干扰素基因。

（ⅲ）连接：用限制性内切酶DdeI切割干扰素基因，产生粘端，与合成基因部分由T4  DNA连接酶催化连接成融合基因。随后将融合基因经连接酶催化连接组装入原核表达质粒pBV220中，经DNA测序证明与设计相符。

（ⅳ）表达：融合基因在pBV220中由PRPL串联启动子控制在大肠杆菌中表达重组蛋白，即重组的脑啡肽-干扰素融合蛋白。

（ⅴ）纯化：经抗干扰素单克隆抗体亲和层析纯化。