[发明专利]耐低温轮虫育种方法

说明书

一种耐低温轮虫育种方法，属于水产养殖技术领域，主要用于培养耐低温的作为仔鱼虾类开口饵料的轮虫，发展水产养殖事业。

在已有技术中物种个体小、广盐性、繁殖率高、易于高密度培养的褶皱臂尾轮虫（Brachionus  Plicatilis）从60年代起在日本就被用来作为仔鱼的开口饵料，目前已广泛用来作鱼虾饵料，因此世界沿海各国对轮虫的研究十分重视，但对这种轮虫的研究多停留在生态分布、形态分类、营养、繁殖、养殖和生化等方面，在育种方面只有日本人曾选育出大型（L）和小型（S）轮虫品系，但它们是通过自然筛选法得到的，不属于人工育种之列。另据报导我国台湾省曾从裴济引进了一种小型轮虫（S）亦不是育种。现有研究成果均表明轮虫是喜温性动物，适宜生长温度为20～30℃，最适温度为25℃。我国北方对虾人工育苗一般是在每年4～5月份进行，这时的水温在20℃以下，轮虫难以繁殖生长，因此我国对虾育苗主要是以蛋黄、合成饵料以及卤虫卵为饵料，而无法用褶皱臂尾轮虫这种理想的饵料。大量使用蛋黄及合成饵料易造成虾池水质污染引起虾病，卤虫不仅资源贫乏，而且卤虫卵孵化率低，不得不从国外购买卤虫卵。为了提高对虾人工育苗的经济效益，发展养殖事业，必须研究出能在对虾育苗时期能快速繁殖和生长的耐低温的轮虫的育种方法。

经查阅刘卓等编著，1990年农业出版社出版的“饵料浮游动物培养”、郑技修所写刊登在（台）中国水产1989年第二期上的报导“裴济产小型轮虫之引进与大量培养”、朱九明1988年著“激光辐射在细胞学遗传学领域的应用”、Wendy  Fulks  of  al，1991，Roti  fer  and  Microalgae  Culture  Syetems，以及截止到目前我国专利局出版的专利公报均未发现有与本发明相同或相类似的技术，1991年7月2日请青岛市科技情报研究所使用美国“DIALOG”国际联机情报检索系统进行了检索，亦未发现有关报导。

本发明的目的在于提供一种方法比较简单易学，所用仪器设备不多，投资少，见效快，能人工培育出在15℃低温下快速繁殖生长且广温性，适于大规模培养、和我国北方对虾育苗季节相适应，能给对虾育苗提供理想饵料的耐低温轮虫育种的新方法。

根据遗传变化基本原理特别是260～266nm的短波激光能改变DNA模板活性使其单链断裂，使DNA分子构裂发生变化的事实和褶皱臂尾轮虫生态和形态特征，针对已有技术中存在的主要问题，本发明的基本构思是：以激光及化学诱变剂处理轮虫，使其卵巢内卵细胞的DNA发生遗传变化;待卵细胞发育成为轮虫后，即得到突变个体;利用激光及化学诱变交替进行，以提高突变频率;再使用低温作为选择压力，对不定向的突变进行低温定向选择，从而得到耐低温的轮虫品系。

本发明的特征在于所述的耐低温轮虫育种方法，由激光诱变及化学诱变交替进行和群体定向选择与个体定向选择相结合两个部份构成;上述的激光诱变的条件是：激光波长260～266nm，单脉冲输出功率为4～8mj，光斑直径4～6mm，脉冲宽度为10～20n⁸;激光诱变的具体方法是：先从养殖生长良好的轮虫的水体中抽出部份水，使这种生长良好的轮虫浓缩，即单位水体内轮虫个数增多，然后用细滴管将上述浓缩后的轮虫滴到细胞培养板上，每滴的直径4～6mm，里面含有5～20个轮虫，再将激光光斑对准小滴照射1～2次，每次一个脉冲;上述的化学诱变，其诱变剂为N-甲基-N′-硝基-亚硝基胍（MNNG），浓度为20～40ppm，处理时间为20～60分钟，处理方法是：先用带有上述化学诱变剂的培养液浸泡轮虫，再用干净海水冲洗，然后进行培养;上述的群体定向选择和个体定向选择相结合是：选择压力温度为10～15℃，先将上述诱变处理过的轮虫至少分放到10个容器中，每个容器内所含有的轮虫数量均相同，经40～60天相同条件下的培养，从中选出1～3个生长最好的群体，再从选定的这1～3个优良群体中，每个群体各取出50～100个轮虫个体，进行单克隆化个体选择，然后从生长最好的克隆中选出5～10个个体进行生长参数测试，最后从中选取2～3个品系进行大规模培养和饵料效果实验。上述的激光诱变及化学诱变交替，可以两次激光诱变和一次化学诱变交替，也可以两次激光诱变和两次化学诱变互相穿插交替进行。