[发明专利]胸腺细胞无性细胞系的建立及培养

说明书

本发明涉及一种细胞融合方法，利用骨髓瘤与胸腺细胞的融合，属于无性细胞的建立与培养方法。

近年来医学研究证明，胸腺所分泌的胸腺肽实际是多种活性肽的混合体，包含了40多种成份，胸腺肽象其它细胞活性因子（如前列腺素、尿激酶原，胆红素等）一样大都由动物组织（或血液、尿液等）直接提取，在一定程度上受到组织来源，纯化工艺或产量上的多种限制。

本发明的目的在于提供一种胸腺细胞无性细胞的培养方法，将骨髓瘤细胞系与动物胸腺细胞融合，培养出可分泌无种属特性的胸腺肽的无性细胞系。

本发明的特征是利用骨髓瘤为无性细胞系，加入动物胸腺细胞，通过融合剂使其进行细胞融合处理，将于处理后的细胞置于HAT选择培养液中，出现克隆细胞生长后按有限稀释法进行单克隆化，获得胸腺肽细胞无性细胞系。

下面结合操作过程详细叙述本发明：

本发明的材料为小鼠骨髓瘤细胞系（NS-1），常规生长培养液及选择培养液（RPMI-1640及HAT），融合剂为50%PEC（MW4000），细胞冻存液为10%DMSO。各种胸腺细胞无性细胞系的基本特征是可分泌胸腺肽等细胞活性因子。

在细胞融合过程中，首先将纯系幼鼠胸腺在室温下轻轻磨碎，制成单细胞悬液，然后将10⁸动物胸腺细胞与4×10⁷个NS-1细胞悬液充分混合，滴加0.5ml50%PEG（二甲基亚砜）进行细胞融合处理，然后将处理后的细胞悬浮在HAT选择培养液中，继而移入含饲养细胞的40孔微量培养板中，每孔0.1ml，最后放入含5%CO₂湿度饱和的37℃温箱中培养，隔日换液，融合后7-10天出现克隆细胞生长，将融合细胞克隆按有限稀释法进行单克隆化，待单克隆细胞布满3/5孔，过夜培养测定上清活性。最后构建成胸腺细胞的无性细胞系。细胞系的冻存是以1/10DMSO冻存液悬浮10胸腺无性细胞/ML，每瓶加入1ml，熔封口，置-20℃水箱过夜，次日移入液氮保存。

本发明的特点为利用细胞融合技术，将骨髓瘤与胸腺融合，免去了常规从动物组织直接提取法在组织来源，纯化工艺或产量和活性上的多种限制，为这类细胞活性因子的开发开辟了一种新途径。