[发明专利]新的昆虫痘病毒表达系统

说明书

本发明总地涉及重组产生蛋白质的领域，尤其是涉及新的重组昆虫痘病毒蛋白质，蛋白调节序列和它们在转化之宿主中表达异源基因中的应用。

按照分类学痘病毒属于脊索痘病病毒家族，其成员感染脊椎宿主，如牛痘真痘病毒（Orthopoxvirus  vaccinia），或属于昆虫痘病毒家族。除了个别成员的昆虫宿主范围外，对于昆虫痘病毒家族的成员了解甚少。昆虫痘病病毒（EPV）的一个种是桑红缘灯蛾（Amsacta  moorel）昆虫痘病毒（AmEPV），它最初是从桑红缘灯蛾的幼虫中分离出来的[Roberts  and  Granados，J.Invertebr.Pathol.，12：141-143（1968）]。AmEPV是一种典型的B属EPV，并且是三种已知可以在培养的昆虫细胞中进行复制的EPV之一[R.R.Granados  et  al，“Replication  of  Amsacta  moorei  Entomopoxvirus  and  Autographa  californica  Nuclear  Polyhedrosis  Virus  in  Hemocyte  Cell  Lines  from  Estigmene  acrea”，in  Invertebrate  Tissue  Cuture  Applications  in  Medicine，Bioloqy，and  Agriculture，E.kurstak  and  K.Maramorosch（ed.），Academic  Press，New  York，pp.379-389（1976）;T.Hukuharaet  al，J.Invertebr.Pathol.，56：222-232（1990）;and  T.Sato，“Establishment  of  Eight  Cell  Lines  from  Neonate  Larvae  of  Torticids（Lepidoptera），and  Their  several  Characteristics  Including  Susceptibility  to  Insect  Viruses”，in  Invertebrate  Cell  Systems  Applications，J.Mitsuhashi（ed.），Vol.Ⅱ，pp.187-198，CRC  Press，Inc.，Boca  Raton，Florida（19889）]。

AmEPV是少数能在昆虫细胞培养物中复制的昆虫痘病毒之一;AmEPV不能够在脊椎动物细胞系中复制。该AmEPV双股DNA基因组大约为225kb，非常富含A-T（18.5%G+C）[W.H.R.Langridge  et  al，Virolegy，76：616-620（1977）]。最近，公开了一系列AmEPV的限制性酶切图[R.L.Hall  et  al，Arch.Virol.，110：77-90（1990）]。没有检测出与牛痘病毒DNA的同源性[W.H.Langride，J.Invertebr.Pathol.，42：77-82（1983）：W.H.Langridge，J.Invertebr.Pathol.，43：41-46（1984）]。

AmEPV的病毒复制与其他痘病毒的病毒复制周期相似，不同的只是在感染过程中闭合病毒出现较晚。对于AnEPV，一旦感染了细胞，闭合的和细胞外的病毒颗粒均可产生。成熟的闭合体颗粒，在感染过程中对病毒粒子起环境保护作用，它由包埋在晶体基质中病毒组成，该基质则主要由一种蛋白质即河豚精蛋白组成。据报道，做为AmEPV主要结构蛋白质的河豚精蛋白分子量为110千道尔顿（KD），含有高比例带电荷的含硫氨基酸[Langridge  and  Roberts，J.Invertbr.Pathol.，39：346-353（1982）]。将病毒和病毒蛋白用于真核宿主载体系统一直是大量研究和探索的主要课题。许多现存的病毒载体系统由于具有明显的缺点和局限性而限制了其实用性。例如，许多真核病毒载体在哺乳系统中有致瘤或致癌作用，将会产生与所得基因产物和意外感染相关的严重健康和安全问题。而且，在某些真核宿主一病毒载体系统中，基因产物本身表现出抗病毒活性，从而降低了该蛋白质的产量。