[发明专利]人的透明带蛋白质ZP3

说明书

本发明涉及一种具有人ZP3活性或至少部分具有人ZP3抗原性的多肽或其功能性衍生物。

在受精过程中，哺乳动物配子间的最初相互作用是由精细胞与环绕在雌性配子周围的透明带（ZP）上的种类特异性受体结合而引起的。ZP是一种胞外基质，它是由称为ZP1，ZP2和ZP3的三种糖蛋白组成，已鉴定出其中的ZP3是精子受体（reviewed  in  Wassarman，Development  108，1-17;1990）。

用猪和鼠ZP蛋白进行的大量体外和体内研究表明在以研究免疫避孕为目的的试验方案中ZP3是一种重要的靶抗原候选物（Henderson  et  al.，J.Repord.Fert.83，325-343;1988以及其中的参考文献）。最近通过用抗一鼠ZP3抗体筛选鼠卵巢cD-NA表达文库而进行鼠ZP3cDNA的克隆和定性表明向该目的迈出了重要一步（Ringuette  et  al.，Developmental.Biology  127，287-295;1988）。因此，ZP3  cDNA探针可用于分离相应的基因组ZP3  cDNA（Chamberlin  and  Dean，Developmental  Biology  131，207-214，1988;Kinloch  et  al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA  85，6409-6413，1989）。

用由鼠ZP3氨基酸序列产生的寡聚肽免疫接种雌鼠后导致长期不育的研究结果加强了ZP3由于避孕的潜在能力（Millar  et  al.，Science  246，935-938;1989）。

由于ZP3精子受体具种类特异性因而鼠多肽不适用于男性的免疫避孕。而且，来自非人源的多肽在男性体内引起不期望有的免疫应答。因此，研制一种基于人精子受体（一部）分的安全和有效的避孕疫苗需要人ZP3多肽的可得性及其有关它的更多资料。

当然从雌配子中分离足够量的人ZP3多肽是不可能的。但是，我们已经成功地鉴定一个人基因且分析出它的序列。这项研究表明利用重组DNA技术或固相多肽合成方法而生产ZP3多肽和/或ZP3多肽片段具有可能性。因此，本发明包括一种至少编码了部分的人ZP3多肽的新的DNA分子。所说的DNA分子至少包括图2中显示的部分序列。

本发明还包括至少由上面所述DNA分子的部分序列编码的一种多肽。所述多肽至少包括显示于图2中的氨基酸序列的一部分。

当然，根据本发明得到的肽的功能性衍生物和该多肽的片段也包括在本发明范围内。功能性衍生物是指包括其中一个或多个氨基酸被一种化学结构相类似的氨基酸取代的多肽。当然关键是这些多肽仍显示人ZP3抗原性。即是说在施用后（可能与一种佐剂一起用）它仍能激发产生识别人ZP3的抗体。

本发明的多肽可以通过合成或重组DNA技术产生。生产合成多肽的方法在本领域内是已知的，不需要进一步详细描述。

利用重组DNA技术生产多肽是一种已知的一般性方法，但也有很大可能性会导致稍微不同的结果。所表达的多肽是由一个DNA序列编码或更精确地说是由一个核酸序列编码的。该核酸序列（有选择地）转录和转译成所要的多肽。为了达到目的，通过将该核酸序列克隆到一个载体上，用该载体转化一种寄主细胞。该载体能自我复制或者可以整合到寄主DNA上。

不同寄主细胞产生不同的多肽。原核生物不具有进行糖基化所必需的细胞器。由原核生物产生的多肽链将不带糖侧链。真核生物具有进行糖基化的机构，但酵母细胞具有与哺乳动物细胞不同的糖基化作用类型。

对于本发明所述的多肽，优选的表达系统是具有最“天然”的糖基化类型。为达到这个目的，哺乳动物细胞是最优选的。

我们也已经鉴定了可能具有避孕能力的人ZP3多肽上的抗原决定族。这些抗原决定基至少包括下述序列之一的一部分：

类似这些序列的小多肽更容易通过合成方法生产。这些多肽也可以用相同或不同“抗原决定基”连接在一起而形成一个较大的更具抗原性的多肽。

本发明所有多肽的一个目的是要利用这些多肽生产一种避孕疫苗。免疫接种可以是被动或主动免疫。

对于主动免疫接种，将本发明的多肽（可能与一种佐剂一起）施用于女性。给药以后在女性体内产生一种免疫应答。在卵上产生识别人ZP3的抗体。这些抗体将特异性地与精子受体结合位点结合致使精子不能结合，或者该抗体通过位致障碍而阻止这种结合。被动免疫基本上以同样方式进行。但不是以该抗原或它的模拟物接种，而是直接以该抗原的抗体给药。因此必须得到抗本发明多肽的抗体。