[发明专利]红发夫酵母细胞的球状体融合

权利要求书

1、稳定的红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)融合细胞株，当在摇瓶中于适当条件下培养时，该菌株产生约1430μg/g至1660μg/g虾青素，约2350μg/g至2950μg/g总类胡萝卜素，且基于干重提供至少24%的收率，同时基于5天摇瓶培养物测定，产率为大约4500μg/L至8600μg/L，其中菌株被培养在利于该菌株达到差不多最佳生长的适当条件下。

2、根据权利要求1的菌株，其中该菌株基于5天摇瓶测定提供约7600μg/L至8600μg/L的产率，其中该菌株被培养在利于其达到差不多最佳生长的适当条件下。

3、根据权利要求1的菌株，其中该菌株的百分收率为大约25%至28%。

4、保藏在NRRL登记号为Y-18730的红发夫酵母菌株。

5、保藏在NRRL登记号为Y-18731的红发夫酵母菌株。

6、保藏在NRRL登记号为Y-18732的红发夫酵母菌株。

7、保藏在NRRL登记号为Y-18733的红发夫酵母菌株。

8、保藏在NRRL登记号为Y-18734的红发夫酵母菌株。

9、生产适用于细胞融合之红发夫酵母原生质球状体的方法，其包括在适当条件下使带有细胞壁的活红发夫酵母细胞与有效量的得自Trichoderma  harzianium的适当消化酶制剂接触，以利于除去所说的细胞壁并形成活的红发夫酵母球状体。

10、根据权利要求9的方法，其中消化酶制剂选自于Novo  Enzyme  SP-299-Mutanase和Novozyme  SP-234。

11、根据权利要求9的方法，其中红发夫酵母细胞在PH范围大约为PH4.5至5.0的条件下与适当的消化酶制剂接触。

12、根据权利要求9的方法，其中与消化酶制剂接触的红发夫酵母细胞至少达到了其生长周期的晚期对数生长期。

13、根据权利要求9的方法，其中红发夫酵母细胞与消化酶制剂接触约2小时。

14、融合红发夫酵母细胞的方法，其包括

a）使带有细胞壁的活的红发夫酵母细胞在适当条件下与得自harzianium木霉的适当消化酶制剂接触，以除去所说的细胞壁并形成活的红发夫酵母球状体;

b）以有利于一个或多个球状体融合的方式处理所说的球状体。

15、根据权利要求14的方法，其中消化酶制剂是Novo  Enzyme  SP-299-Mutanase和Novozyme  SP-234。

16、根据权利要求14的方法，其中红发夫酵母细胞在大约PH4.5至PH5.0的范围内与适当的消化酶制剂接触。

17、根据权利要求14的方法，其中与消化酶制剂接触的红发夫酵母细胞至少已达到了其生长周期的晚期对数生长期。

18、根据权利要求14的方法，其中红发夫酵母细胞与消化酶制剂接触约2小时。

19、根据权利要求14的方法，其中在等渗溶液中洗涤除去所说的细胞壁后所形成的活的红发夫酵母球状体，以除去其中所说的消化酶制剂，然后以一种有利于一个或多个球状体融合的方式处理所说的球状体。

20、根据权利要求14的方法，其中有利于融合的处理所说的球状体的方式是使所说的球状体与含有有效量聚乙二醇的等渗溶液接触10分钟至大约20分钟。

21、根据权利要求14的方法，其中有利于融合的方式是使所说的球状体与含有20%聚乙二醇的等渗溶液接触。