[发明专利]一种新型的ANA、抗DNA联合检测法

说明书

本发明涉及到一种实验室的免疫检测技术，具体地说，也就是涉及到一种医学疾病诊断方法的检测。

系统性红斑狼疮（SLE）是侵犯皮肤、关节、肾脏、肝脏、心脏等多器官的自身免疫性疾病，患者血清中存在有多种自身抗体，其中主要有抗核抗体（ANA）和抗双链的脱氧核糖核酸抗体（d_s-DNA）。血清中ANA阳性率高达0.80-0.96%，但其他风湿性性疾病如皮肌炎、硬皮病、结缔组织周围炎等ANA亦可阳性。因此为了鉴别这些疾病，寻找一种特异性高又灵敏、快速的检测方法，本发明用锥虫和肝细胞配合后组成双抗原底物，可同时检出ANA和抗DNA抗体。

经联机检索美国专利近40年及世界专利近10年无此检测方法，近期首都医院徐世正等“测定双链DNA抗体新方法”一文，其主要方法为用感染锥虫的小鼠剪其尾部滴血直接制片，制成的血片虫体堆积，血细胞极少或没有有核细胞，此片只能做抗DNA单一染色，无法做ANA染色。

本发明的任务在于为克服现有技术的不足，并能同时在一张玻片上、一个视野里发现两种抗体的存在为目的而实现的。

本发明通过以下几个途径完成：

（一）锥虫的形态及结构：锥虫是一种单细胞原生动物，能寄生于许多动物体内，如牛、羊、马、狗、兔、鼠均可被感染而患锥虫病。锥虫的虫体呈纺锤状、梭形、柳叶形等，伊氏锥虫体长15.6-31.3μ左右、宽1.5-2.5μ，瑞士染色镜下可见紫红色的体核和动基体，浅红色的波动膜和鞭毛。

（二）双抗原底物的制备：取锥虫数条用无菌生理盐水混和腹腔接种小白鼠，防蚊、防蝇喂养3-7天，待小鼠发病至睡眠状态后，尾部取血作锥虫计数，锥虫达5-10⁷/mm²时用肝素抗凝，小白鼠临死前1-1.5小时作眼球后取血，再将死鼠解剖取出肝脏，用肝脏的切面沾上含有锥虫的血液在洁净玻片上轻轻压印一下，制成一层薄的具有肝细胞和锥虫的双抗原底物。室温凉干后，用玻璃纸包好置于5--40℃最佳4--30℃内保存备用。

（三）检测方法：取患者血清。用间接免疫荧光法（同ANA法）、FITC最大吸收光谱520-530nm，每例标本做原配血清1∶10、1∶20、1∶40、1∶80五个滴度，将上述血清分别加于五个含有锥虫和肝细胞的印片上，经染色后镜检有翠绿色荧光者为阳性，锥虫的体核和动基体发出一大一小亮绿色荧光为双链DNA抗体阳性，肝细胞亮绿色为抗核抗体阳性，无绿色荧光者为阴性。

本发明的特殊功能在于：一种检测手段可得出两种检策效果，患红斑狼疮的病人能够很快明确诊断，得到及时治疗;使用本方法省时、省力、节约试剂，减轻病人经济负担。