[发明专利]核糖体失活蛋白质及其衍生物

说明书

本发明涉及可用于制备免疫毒素的核糖体失活蛋白质以及它们的疏基衍生物。

由植物得到的核糖体失活蛋白质（RIPs）（Cancer        Surveys        1，489，1982;J.Natural        Products.48，446，1985，FEBS        Letters.195，1，1986）使得真核生物核糖体的60s核糖体亚单位催化失活。它们可以是单链蛋白质（RIPS        1型）或双链蛋白质（RIPS        2型）、其中的一条链具有酶活性而另一条具有半乳糖特异性植物血凝素的性质。RIPs        1型较为常见，它存在于许多并且有可能是几乎所有植物的若干部分中，包括种子、根、叶和植物乳汁中，有时以多于一种的形式，可能为异构体形式存在。RIPs具有一个独特的N-糖苷酶活性，并且断裂28s        rRNA中腺嘌呤4324的N-糖苷键，造成一种损伤，使得RNA可以在由α-sarcin诱导产生的断裂的邻近位点被苯胺裂解。这就使得核糖体不能与延伸因子1或2结合，因而阻碍了蛋白质的合成。尽管它们有许多结构上的相似之处，以及相同的酶活性，但是对于源于不同生物体的核糖体（源于植物、原生动物、昆虫及后生动物），RIPs具有不同的作用。

由于RIPs已用作为“免疫毒素”的成分，所以对它的兴趣愈来愈增加，“免疫毒素”是由连到抗体上去的毒性分子部分组成的杂化分子。免疫毒素将有希望用于消除有害细胞、肿瘤细胞、免疫活性细胞及寄生细胞。这些细胞被认为是可能的靶细胞（Cancer        Immunol.Immunother        27，95，1988）。

对RIPs另外的兴趣是来自于它们的抗病毒活性，所有被试验的RIPs都能抑制植物和动物病毒的感染。实际上，首先发现的RIP        1型即商陆植物抗病毒蛋白质（PAP）最初纯化为一种抗病毒蛋白质。RIPs的这种性质归因于它更容易穿透到病毒感染的细胞中，因而使这些细胞的核糖体失活，并且阻碍了病毒的繁殖。可是最近发现，一种1型RIP，Trichosanthin，它通过一个显然与对核糖体作用无关的机制，来抑制人类免疫缺陷病毒的复制。

有用的是，得到一些用于制备免疫毒素的RIP、得到对一些RIPs具有抗性的细胞起活性作用的共轭物，并且防止因用药后的免疫反应造成的中和作用以及在共轭作用过程中一些RIPs失活所引起的问题。

现已发现可以从植物木鳖（Momordica        Cochinchinensis）Bryonia        Dioica        e        Asparagus        Officinalis中得到的新的核糖体失活蛋白质。所述植物在先前已被研究过，没有认识到它们里面存在有本发明的蛋白质，这种蛋白质的特征是比从同一植物种中提取的已知的类似蛋白质具有显著更高的活性。例如从木鳖（一种产于印度的葫芦科植物）中提取的蛋白质与已知从一些苦瓜属（Momordica        Genus）（苦瓜（Momordia        Charantia））中提取的已知Momordine相比显示出人意料的不同特性。类似的是，从Asparagus        officinalis        L.（Biochem.J.216，617，1983）得到的三种糖蛋白是已知的，而从该同种植物中提取的本发明物质是具有不同生物和物理化学性质的蛋白质，本发明蛋白质的活性在于主要是在无细胞体系中有效地抑制蛋白质的合成：尽管对于大多数哺乳动物的细胞毒性很小，但是它们可以通过（用合适的化学试剂）-共轭到合适的载体（“Haptomers”）例如单克隆抗体上，而转化成为高度细胞毒性剂。如果所述载体对肿瘤细胞是抗原特异的，则可以使用所述新的RIPS进行肿瘤细胞的选择性破坏。

还发现本发明的蛋白质能够在用各种病毒包括人类免疫缺陷病毒（HIV1）忽性传染的培养细胞中抑制病毒的复制。

本发明还涉及所述RIPs的引入了疏基的衍生物，这种衍生物由式Ⅰ表示。所述衍生物与起始RIPs相比具有相同的或略低的抑制活性，因此，由于它们都是起始RIPs释放到细胞中的免疫毒素与抑制剂的合成中间体，所以对于制备抗体毒素结合物是有用的。

（其中Tox表示有关的RIP;Y、R和X的含义见下文）