[其他]编码脱乙酸基头孢菌素C合成酶和脱乙酰头孢菌素C合成酶的重组DNA表达载体及DNA化合物

权利要求书

1、一种编码头孢霉的DACS/DAOCS活性的重组DNA顺序。

2、权利要求1的重组DNA顺序，它编码具有下述结构的蛋白质：

其中，ALA是丙氨酸残基，ARG是精氨酸残基，ASN是门冬酰胺残基，ASP是门冬氨酸残基，-COOH是羧基末端，CYS是半胱氨酸残基，GLN是谷氨酰胺残基，GLU是谷氨酸残基，GLY是甘氨酸残基，HIS是组氨酸残基，H₂N-是氨基末端，ILE是异亮氨酸残基，LEU是亮氨酸残基，LYS是赖氨酸残基，MET是甲硫氨酸残基，PHE是苯丙氨酸残基，PRO是脯氨酸残基，SER是丝氨酸残基，THR是苏氨酸残基，TRP是色氨酸残基，TYR是酪氨酸残基，VAL是缬氨酸残基。

3、权利要求1或2的重组DNA顺序，即：

其中，A是脱氧腺苷基，G是脱氧鸟苷基，C是脱氧胞苷基，T是胸苷基。

4、一种重组DNA载体，包括权利要求1或2的DNA顺序，并进一步包括一个启动子和翻译活化顺序，它们位于驱动编码DACS/DAOCS活性的DNA表达的位置上。

5、权利要求4的重组DNA表达载体，其中所述的启动子和翻译活化顺序在大肠杆菌中起作用。

6、权利要求5的重组DNA表达载体，它是质粒pIT507或pIT511。

7、权利要求4的重组DNA表达载体，其中所述启动子和翻译活化顺序在青霉素中起作用。

8、权利要求7的重组DNA表达载体，它是质粒pPS58、pPS59、pPS60、pPS61或pPS62。

9、权利要求4的重组DNA表达载体，其中所述启动子和翻译活化顺序在头孢霉中起作用。

10、权利要求9的重组DNA表达载体，它是质粒pIT503、pPS52或pPS56。

11、一种通过权利要求2的DNA顺序的插入诱变、缺失诱变、插入和缺失诱变的结合或位点专一性诱变而产生的重组DNA顺序。

12、权利要求11的重组DNA顺序，它是质粒pIT513。

13、一种重组DNA顺序，包括顶头孢霉DACS/DAOCS基因的启动子和翻译活化顺序。

14、一种重组DNA顺序，包括顶头孢霉DACS/DAOCS基因的3′调控顺序。

15、一种重组DNA顺序，它编码DACS或DAOCS活性，并可利用权利要求2的DNA化合物作为探针进行鉴别。

16、一种在重组的宿主细胞中表达DACS/DAOCS活性的方法，包括：

（1）用一个重组DNA表达载体转化宿主细胞，该载体包括：

（a）一个能在宿主细胞中起作用的启动子和翻译活化顺序;

（b）一个编码DACS/DAOCS活性的DNA顺序，此顺序位于由启动子表达的位置;

（2）在DACS/DAOCS活性能够表达的条件下培养步骤（1）中转化的宿主细胞。

17、权利要求16的方法，其中的重组宿主细胞从大肠杆菌、头孢霉和青霉组成的一组中选择。

18、权利要求16或17的方法，其中步骤（2）所培养的重组宿主细胞是大肠杆菌K12JM109/pIT507、大肠杆菌K12JM109/pIT511、产黄青霉/pPS59、产黄青霉/pPS61、产黄青霉/pPS62、顶头孢霉/pIT503、顶头孢霉/pPS52、顶头孢霉/pPS56、大肠杆菌K12/pIT507或大肠杆菌K12/pIT511。

19、一种在青霉宿主细胞中生产头孢菌素的方法，包括用含有编码DAOCS活性的基因的重组DNA表达载体转化宿主细胞。

20、权利要求19的方法，其中的表达载体还含有编码DACS活性的基因。

21、权利要求19或20的方法，其中的基因编码顶头孢霉的DACS/DAOCS活性。