[发明专利]人体胰岛素前体转化为人体胰岛素的方法无效
| 申请号： | 87107019.7 | 申请日： | 1987-10-13 |
| 公开（公告）号： | CN1029131C | 公开（公告）日： | 1995-06-28 |
| 发明（设计）人： | 布鲁斯·希尔·弗兰克;里查德·尤金·海尼;沃尔特·弗朗西斯·普劳蒂;马克·罗伯特·沃尔登 | 申请（专利权）人： | 伊莱利利公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K7/40 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 | 代理人： | 杨九昌 |
| 地址： | 美国印*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人体 胰岛素 转化 方法 | ||
1、一种应用胰蛋白酶和羧肽酶B使人体胰岛素前体转化为人体胰岛素的方法，这种前体的化学式为：
式中R是氢、用化学的或酶促的方法可切开的氨基酸残基，或者用化学的或酶促的方法可切开的至少含有两个氨基酸残基的肽部分；
R1是OH、Arg-Y，或Lys-Y，其中Y是OH、氨基酸残基，或者至少含有两个氨基酸残基的肽部分；
从A-1至A-21部分是人体胰岛素A链；从B-1至B-30部分是人体胰岛素A链；从B-1至B-30部分是人体胰岛素B链；以及
X是与胰岛素A链上A-1的氨基和胰岛素B链上B-30的羧基相连接的部分，这部分可以被酶促地从A链或B链上切开而且不破坏A链和B链，
其特征在于该方法包括在含有缓冲剂的水介质中用胰蛋白酶和羧肽酶B处理这种人体胰岛素前体，该水介质每含1摩尔人体胰岛素前体则含有约0.1至2摩尔的一种或多种选自镍、锌、钴、镉和铜的金属离子。
2、根据权利要求1的方法，其中将第二族的金属离子钙加到该混合物中，其加入量为每摩尔人体胰岛素前体加入约0.5摩尔至5摩尔钙。
3、根据权利要求1或2的方法，其中人体胰岛素前体以高达约20mM的浓度存在于含有缓冲剂的水介质中。
4、根据权利要求3的方法，其中人体胰岛素前体以约1mM至约3mM的浓度存在于含有缓冲剂的水介质中。
5、根据权利要求1或2的方法，其中该金属离子的存在量为每摩尔人体胰岛素前体则存在约0.33至约0.6摩尔。
6、根据权利要求3的方法，其中该金属离子的存在量为每摩尔人体胰岛素前体则存在约0.33至约0.6摩尔。
7、根据权利要求4的方法，其中该金属离子的存在量为每摩尔人体胰岛素前体则存在约0.03至约0.6摩尔。
8、根据权利要求5的方法，其中羧肽酶B的存在量按重量计和人体胰岛素前体之比为约1∶10至约1∶5，000，而胰蛋白酶的存在量按重量计和人体胰岛素前体之比为约1∶20至1∶250，000。
9、根据权利要求6的方法，其中羧肽酶B的存在量按重量计和人体胰岛素前体之比为约1∶10至约1∶5，000，而胰蛋白酶的存在量按重量计和人体胰岛素前体之比为约1∶20至约1∶250，000。
10、根据权利要求7的方法，羧肽酶B的存在量按重量计和人体胰岛素前体之比为约1∶10至约1∶5，000，而胰蛋白酶的存在量按重量计和人体胰岛素前体之比为约1∶20至1∶250，000。
11、根据权利要求1或2的方法，其中羧肽酶和胰蛋白酶的重量比为约1∶1至约10∶1。
12、根据权利要求3的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
13、根据权利要求4的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
14、根据权利要求5的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
15、根据权利要求6的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
16、根据权利要求7的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
17、根据权利要求8的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
18、根据权利要求9的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
19、根据权利要求10的方法，其中羧肽酶B和胰蛋白酶之重量比为约1∶1至约10∶1。
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