[其他]抗人心房钠尿肽的单克隆抗体

说明书

本发明关系到一般的新杂交瘤细胞株，特别是产生对人和大鼠心房钠尿肽（ANP）有特异性的单克隆抗体（mAb）的细胞株，采用这种方法无论在体内还是体外产生mAb，可以有助于诊断和用于研究目的。

将骨髓瘤细胞和免疫小鼠的脾细胞进行融合（Koehler和Milstein，自然，256，495-497（1975）），首次表明可以得到产生均一抗体（称为“单克隆”抗体）的传代细胞株。此后，科学工作者作了种种努力以制备多种杂交细胞（称为“杂交瘤”），并且利用形成的抗体进行了许多科学研究（例如：微生物学和免疫学的当前课题，Vol.81-“淋巴细胞杂交瘤”，F.Melchers    et    al.，Springer    Verlag，1978，附有参考文献;C.Barn-stable等，细胞14，9-20（1978）;P.Parham，W.F.Bodmer，自然276，397-399，实验免疫学手册，第三版，第2卷，D.M.Wier，编辑，Blackwell    1978，25章;化学工程新闻，15-17（1979）9）。这些发表的文章叙述了利用杂交瘤产生单克隆抗体的主要技术。

已经得到了抗组织相容性抗原，抗半抗原，旦白质和酶的单克隆抗体。但是还没有高度选择性的同哺乳动物，例如人或大鼠心房钠尿肽类反应的单克隆抗体。

心房钠尿肽是一类具有不同链长的肽类，它的最低限度活度序列由23种氨基酸组成。含有其他N-未端和C-未端的氨基酸的肽类活性也是相同的。这种肽是在心房中由一种大约152个氨基酸组成的前体分子通过酶的作用而形成的。编码ANP的基因已进行了克隆，DNA已进行了序列分析。

ANPs诱导持续期短，但有效的钠尿作用至今尚不能表明这种物质作用的精确管状位点。此外，ANPs是有效的血管扩张剂，换言之，它对正肾上腺素，血管紧张素Ⅱ，组织胺和5-羟色胺对血管的活性有拮抗作用。ANPs的作用不被消炎痛所抑制，关于其作用是通过内源前列腺素合成进行的看法似不可靠。对于ANP对two-clip低血压大鼠和SH大鼠的降血压作用已进行了叙述。

在分离的细胞中，对醛固酮和后叶加压素分泌的抑制作用已进行了测定。可以采用常规的抗体放射免疫学方法测定ANP的血浆水平，这取决于特定实验动物的体积大小，采用磺¹²⁵标记的ANP衍生物可以测定对分离层血管球细胞的特异结合。最初的实验表明，在肾中，ANP可以诱导激肽释放酶的释放。在一定情况下，这种肽对肾的活性可以由于用氟丁苯（haloperidol）予处理而失效（见Segn-ella和MacGregor，自然399，666-668，1984）。ANP的活性谱表明，这些肽可能与循环失调（高血压、低血压、动脉硬化），心脏功能失调（急性和亚急性心脏功能不全，心肌梗塞、心律不齐、冠心病）以及肾功能失调（各种基础紊乱过程中的急性和亚急性肾功能不全，尿毒症）是相关的，因此，定量测定不同生物体液中的ANP（例如，血液、血浆、血清、尿、淋巴液或脑脊髓液）对于上述各种症状是十分重要的。

采用常规抗血清测定某些ANP在血浆中的水平是十分高的，这可以通过这些抗体的交叉反应或缺少特异性来予以解释。利用高特异性的（单克隆）抗体可以避免心房钠尿肽在血浆中错误高水平的冒险测定。因此，这种类型的抗体适用于诊断与ANP水平变化有关的所有失调症。

本发明关系到制备能够合成和分泌抗心房钠尿肽的杂交瘤细胞系。本发明还关系到能够合成和分泌抗哺乳动物特别是抗人或大鼠的那些心房钠尿肽的特异单克隆抗体的杂交瘤系。采用介绍部分Koehler和Milstein所叙述的方法制备杂交瘤。用结合于一种免疫载体例如旦白质的心房钠尿肽免疫小鼠后，将这些鼠的脾细胞同一种鼠骨髓瘤细胞系进行融合。对这样产生的杂交瘤系统地检验了选择性同心房钠尿肽反应的抗体。采用这种方法分离了产生抗心房钠尿肽抗体的杂交瘤，本发明也与这些抗体有关。

产生这些抗体的杂交瘤已储于国立动物细胞培养收集中心和英国Porton Down，Salisbury SP₄OJG应用微生物和研究PHLS中心，保存号为850314/1（产生mAb 11A-A11的杂交瘤细胞系）和850314/2（产生mAb 23M-09的杂交瘤细胞系）。

根据本发明，这些抗体可以用于例如测定心房钠尿肽在生物体液如血，血浆、血清、尿，淋巴液或脑脊髓液中的含量水平。按照本发明，这些抗体特别适于进行免疫学实验，而且，利用免疫吸附层析法，它们也可以用于分离心房钠尿肽。