[其他]将肝炎A病毒净化及三重无性繁殖

说明书

肝炎A病毒（HAV）的分布遍达世界各地。美国每年有高达有高达100，000宗肝炎案是与这种病毒有关的，而且正如其他先进国家一样，有大概20-25%的临床肝炎属于此类。这种病毒在发展中国家的传染性很高，而实际上在这些地区中百分之一百的十岁左右的人口，差不多都受到传染。它主要是通过排泄物-口腔污染传播，又与很多水传播或食物传播的疾病的传染有关。但人与人之间的接触仍是最常见的方法。HAV是很少以胃肠外的方法传播的。

美国专利4，164，566（普罗沃斯特公司）指导怎样在体外培养肝炎A病毒细胞培养物。普罗沃斯特公司使用一种不同的HAV株，这种HAV株最少需要在一隻非人类的灵长目动物内有五条通道去生产HAV。美国专利申请366，165号发明人的目的是要证明HAV可以被孤立，并且在直接从人类临床样品中取出初级非洲绿猴肾脏（AGMK）细胞培养物中，可以顺序地排列。

Daemer    et    al，感染与免疫，Vol    32，NO.1，April    1981，pp.388-393。

Purcell    et    al，“肝炎A病毒”，在印制中。

肝炎A病毒的HM-175株在本申请提交前已储存在美国典型培养物保脏中心，因此令储存的培养物有永久性，同时在颁发专利时，公众也可获得该种培养物。

把肝炎A病毒HM-175株的母籽苗组无性繁殖三倍，便得到一种有效的疫苗，可在人猿及其他如中南美洲小猴的灵长目动物中，产生抗体，但不会产生出疾病。人猿被野生型病毒考验时所产生的保护作用，是疫苗的重要标记。

在初级非洲绿猿肾脏细胞培养物内的通道10和20适应了人类肝炎A病毒的细胞培养物被发现在人猿中有弱化的情况，但却产生血清转化作用，如表1所显示，肝炎A抗体被诱发，而又没有肝病的生物化学迹象。曾经被弱化株感染，及产生肝炎A抗体的人猿，除非试验在初步免疫反应发展中的康复期进行，否则被感染性肝炎A病毒试验时，都不会出现肝炎A病毒（表2）。接受同样物质的防疫注射的中南美洲小猴却培养出肝炎，不过与用野生型病毒注射的比较，却没有那么猛烈（表1与图1）。有细胞组织培养物通道的病毒之减弱稳定性，可以用从曾作防疫注射的动物取得的严重期病毒媒，在别的人猿上作防疫注射（透皮肤的，最好是静脉内的）来证明。接受的动物并没有肝炎的生物化学迹象，但却产生了肝炎A抗体。

肝炎A病毒的HM-175株的母籽苗组在通道层10、20和30中，以最后稀释液无性繁殖三倍。从通道层20取得的细胞系会被判断是否在人猿内有减弱的迹象。在两个受试验的细胞系中，经预防注射的人猿只产生微量，或甚至完全不产生肝炎。在细胞系＃1中，六隻动物只有三隻产生抗体，而在细胞系＃2中，四隻结预防注射的动物中，有三隻产生抗体。

使用肝炎A病毒HM-175株的三重无性繁殖病毒物质，证明它作为活HAV，是人猿的有效疫苗。

这种疫苗适用于哺乳类动物或灵长目动物，包括人、人猿和中南美洲小猴。用于制备疫苗的统一病毒方面，三重无性繁殖的病毒性物质（3X）比两重无性繁殖（2X）的病毒更均匀。此处叙述的母籽苗组，是在通道层10与20以最后稀释液，从三倍无性繁殖的病毒得来的。（Cunningham，A    Laboratory    Guide    in    Virology，5th    ed，Burgess    Pub.Co.，1963，pp.144-145）。冲稀的目的是要从单独一个病毒粒子中产生过程中稀释度最高的正管，因而为产物提供了生物统一性。

在用最后稀释液无性繁殖方面，3X是最适宜于生产统一的病毒或疫苗。3X的引用，是与以下引用的文献相等的：Lennett    and    Schmidt，“Diagnostic    Procedure    for    Viral    and    Ricksettial    Infections，”American    Public    Health    Association，5ed.，1979，p    102;及Dulbecco    and    Vogt，“Plague    Formation    and    Isolation    of    Pure    Lines    with    Poliomyelitis    Viruses，”J    Exp.Med.，99：167-182，1954。

把人类肝炎A病毒HM-175株运进这国家中，在感染与免疫，32（1），April    1981，pp.388-393有描述。

例1