[发明专利]一种低分子量壳寡糖的提取工艺

权利要求书

1.一种低分子量壳寡糖的提取工艺，其特征在于，具体步骤如下：

(1)先将短柄帚霉-红球菌发酵物、木瓜蛋白酶、纤维素酶混合制成复合酶，接着将复合酶利用N-琥珀酰壳聚糖为载体，经N,N’-亚甲基双丙烯酰胺交联，得到酶制剂；

(2)再将螃蟹壳粉碎成螃蟹壳粉，接着将螃蟹壳粉与玉米浆混合得到混合料，灭菌，向混合料中接入复合菌，在高频交变磁场条件下发酵，得到发酵产物；

(3)然后将发酵产物进行电解处理，加入步骤(1)所得酶制剂，酶解，灭酶，γ-射线辐照，后处理，即得壳寡糖产品；

其中，所述短柄帚霉-红球菌发酵物是将短柄帚霉与红球菌混合发酵而得；所述复合菌是将雅致放射毛霉、蓝色犁头霉、茄病镰刀菌、黑曲霉按照相等的活菌数混合而得，该复合菌的总活菌数为3～5×10¹⁰cfu/g。

2.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(1)中，短柄帚霉-红球菌发酵物、木瓜蛋白酶、纤维素酶的质量比为1∶0.5～0.7∶0.2～0.3。

3.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(1)中，所述短柄帚霉-红球菌发酵物是通过以下方法制备得到的：

(A)发酵培养基的配制：以重量份计，取新鲜未发芽的土豆，去皮，切块，加入土豆5～6倍重量的水，煮沸30～40分钟，纱布过滤取滤液，即为土豆汁；然后将3～5份土豆汁、1～2份酵母浸粉、0.8～1份蛋白胨、1～2份3,6-O-羧甲基甲壳素、0.5～0.7份α-五乙酰葡萄糖，0.1～0.2份氯化钠、0.1～0.2份磷酸氢二钾、0.1～0.2份磷酸二氢钾、0.1～0.2份硫酸镁与100份水混合均匀，灭菌，即得发酵培养基；

(B)将短柄帚霉、红球菌活化后按照活菌数1∶0.5～0.8混合，按照体积接种量3～4％接入步骤(A)所得发酵培养基中，发酵，离心取上清，浓缩，干燥，即得。

4.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(1)中，以重量份计，所述酶制剂是通过以下方法制备得到的：先将N-琥珀酰壳聚糖溶于水中，得到0.3～0.4g/mL的N-琥珀酰壳聚糖水溶液，将0.2g/mL氯化钙水溶液与无水乙醇按照体积比1∶1混合均匀得到预混液，再将N-琥珀酰壳聚糖水溶液逐滴滴入等体积的预混液中，搅拌混匀，静置，凝胶化，过滤得凝胶球；然后将1份凝胶球和3～4份N,N’-亚甲基双丙烯酰胺超声分散于12～15份体积浓度20～30％乙醇水溶液中，加热至回流，保温搅拌5～6小时，离心取沉淀即为载体；最后将1～2份复合酶和所得载体加入20～22份水中，400～500W超声波振荡处理3～4小时，离心取沉淀即得所述的酶制剂。

5.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，螃蟹壳粉与玉米浆的质量比为1∶1，玉米浆的干物质质量含量为60～70％。

6.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，复合菌的体积接入量为3～4％。

7.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，高频交变磁场条件为：频率200～300kHz，磁场强度300～400mT；发酵的工艺条件为：pH＝6.5，30～35℃发酵2～3天。

8.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(3)中，电解处理的具体方法为：于硫化锂为电解质、石墨烯为电极的电解槽中，在pH＝5～6和温度55～60℃条件下进行电解处理，电解时间30～40分钟。

9.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(3)中，酶制剂的用量为发酵产物质量的1～2％；酶解的工艺条件为：在pH＝5.0～5.5和温度40～45℃条件下酶解4～5小时。

10.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(3)中，γ-射线辐照采用⁶⁰Co-γ射线，吸收剂量为3～4kGy。