[发明专利]一种耐盐防弧菌抗菌肽FH-18及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种耐盐防弧菌抗菌肽FH‑18及其制备方法和应用，属于生物技术领域。所述抗菌肽FH‑18的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。本发明以高毒性抗菌肽CHY1为模板，通过删除氨基酸缩短肽链长度，氨基酸位置互换形成双亲结构界面，同时也破坏α‑螺旋的双亲性结构，抗菌肽FH‑18显著降低了红细胞溶血性且抗弧菌活性明显提高，治疗指数是CHY1的722倍。通过此方法明显改善了模板肽的细胞毒性，可为替抗产品的选择提供新来源，助力渔业无抗饲料背景下的健康发展。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种耐盐防弧菌抗菌肽FH-18及其制备方法和应用。

背景技术

饲料禁抗、养殖限抗和产品无抗政策严格执行，南美白对虾的传统养殖模式遭受巨大挑战，导致弧菌发病骤升为危害对虾安全出池的首要因素，因此，亟需寻找新型绿色、安全、高效的抗生素替代品。

抗菌肽与抗生素具有不同的抑菌机制，前者以“温和式”干扰多种生物性功能的发挥，而非特异性作用靶位点使其丧失功能，而后者倾向作用于菌体单一靶点。抗菌肽在动物体内无残留，对环境无污染，符合对虾安全生产的需要，适合在饲养过程中使用，具有作为新一代绿色饲料添加剂的潜质。目前，对抗菌肽的开发与应用已经在渔业生产和医药卫生领域广泛开展。

chrysophsin-1(CHY1)，一种分离于鱼鳃的嗜酸性颗粒细胞样细胞的抗菌肽，对鱼类和甲壳类动物的革兰氏阴性和革兰氏阳性病原体表现出强大的杀菌活性。具有以下特征：25个氨基酸长度、净正电荷数+9、疏水性氨氨基占48%、α-螺旋结构、耐高盐、溶血性高。CHY1直接用于生产还有改造空间，如缩短氨基酸长度、降低溶血性等。因此以天然抗菌肽为模板进行分子改造成为研发高效抗菌制剂的热点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种耐盐防弧菌抗菌肽FH-18及其制备方法和应用；与天然抗菌肽CHY1相比，所述抗菌肽FH-18治疗指数更高，长度缩短，CHY1原有优势基本未变。

本发明的目的通过如下技术实现：一种抗菌肽FH-18，所述抗菌肽FH-18的氨基酸序列FFKHIIILWKHLIHRRRH-NH₂，此序列末端羧基酰胺化连接NH₂。

如上所述抗菌肽FH-18，制备方法如下：

（1）以CHY1为母板，首先删除序列残基Ala和Gly，缩短成18个氨基酸长度肽；其次在18个氨基酸肽链中，Trp3与Lys9，Leu4与His8，Lys6与Ile10位置互换；最后Ｃ末端酰胺化而生成抗菌肽FH-18，氨基酸序列FFKHIIILWKHLIHRRRH-NH₂；

（2）采用固相化学合成法通过多肽合成仪得到肽树脂，将得到的肽树脂经过TFA切割后，得到抗菌肽FH-18；

（3）经过反相高效液相色谱纯化后，即完成抗菌肽FH-18的制备。

如上所述的一种抗菌肽FH-18在制备治疗弧菌属感染性疾病药物中的应用。

通过本方法制备的抗菌肽FH-18的实验技术简单，对得到的抗菌肽FH-18进行抗菌和溶血活性检测，发现抗菌肽FH-18溶血活性降低，长度缩短7个氨基酸，保留耐高盐、杀弧菌能力强的优势。综上所述，FH-18是一种具耐高盐防弧菌高应用价值的抗菌肽，将可促进无抗养殖背景下对虾安全出池。

附图说明

图1为CHY1和FH-18的序列特征。

图2为CHY1和FH-18的螺旋轮图。

图3为CHY1和FH-18的抑菌活性。

图4为CHY1和FH-18的溶血活性、治疗指数及盐稳定性。

具体实施方式