[发明专利]一株伪狂犬病病毒弱毒株及其构建方法和应用

说明书

本发明提供一株伪狂犬病病毒弱毒株及其构建方法和应用，属于动物医学的疫苗领域。该伪狂犬病病毒弱毒株，是敲除伪狂犬病病毒AH02LA中TK基因的第184～530位核苷酸、gE基因的第13～1298位核苷酸，将US3基因替换为序列如SEQ ID No:2所示的片段后得到的。本发明伪狂犬病病毒弱毒株，毒力显著降低，免疫原性好，免疫保护效力高，可作为防治PRV变异株的候选毒株。

技术领域

本发明属于动物医学的疫苗领域，具体涉及一株伪狂犬病病毒弱毒株及其构建方法和应用。

背景技术

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的急性、烈性传染病。牛、羊、狐狸、水貂、犬和猫等发生伪狂犬病时常表现为奇痒、狂躁或抑郁等典型神经症状，患病动物死亡率极高。猪是PRV的贮存宿主，其发生伪狂犬病的症状与日龄相关，仔猪呈典型神经症状，死亡率高。育成猪和肥猪感染后通常不发生死亡，主要表现为呼吸道症状，生长停滞，可长期带毒和排毒。母猪常发生流产或产死胎、弱仔和木乃伊胎等。种公猪发生睾丸炎等症状。

疫苗是防控疫病的有效方式。2011年以来，PRV变异株在许多猪场流行，其致病力较传统毒株显著增强，原有疫苗对变异株保护效力不足，造成严重损失。因此，急需开发一种安全性好、免疫保护效力高的伪狂犬病疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一株伪狂犬病病毒弱毒株，该毒株毒力显著降低，免疫原性好，免疫保护效力高，可作为防治PRV变异株的候选毒株。

本发明的另一目的是提供该伪狂犬病病毒弱毒株的应用，以该弱毒株为活性成分的疫苗接种1日龄PRV阴性初生仔猪，安全性高且免疫保护效力高。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一株伪狂犬病病毒弱毒株，是敲除伪狂犬病病毒AH02LA中TK基因的第184～530位核苷酸、gE基因的第13～1298位核苷酸，将US3基因替换为序列如SEQ ID No:2所示的片段后得到的。

本发明还提供所述伪狂犬病病毒弱毒株在制备伪狂犬病疫苗中的应用。

在本发明中，所述伪狂犬病疫苗中的活性成分为所述伪狂犬病病毒弱毒株病毒液。

在本发明中，所述伪狂犬病病毒弱毒株的病毒液采用如下方法制备：将所述伪狂犬病病毒弱毒株接种ST细胞，培养36～48小时，收获病毒培养物，冻融后离心取上清液作为所述伪狂犬病病毒弱毒株病毒液。

本发明还提供一种重组载体活疫苗，其活性成分是在所述伪狂犬病病毒弱毒株基因组中插入了外源保护性抗原基因表达盒后得到的。

本发明密码子去优化的PRV弱毒株可作为载体构建载体活疫苗，启动子可以选择pMCMV IE、SV40和pHCMV IE等，外源基因插入位点选择UL46和UL27、UL35和UL36、UL40和UL41、UL11和UL10之间的非编码区，插入的外源基因可选择猪瘟病毒的E2蛋白基因、猪圆环病毒的Cap蛋白基因、狂犬病病毒的G蛋白基因、口蹄疫病毒的VP1基因和猪流感病毒的HA基因。

本发明活疫苗是以密码子去优化的PRV弱毒株为活性成分的疫苗株，可加入免疫佐剂与疫苗赋形剂等，本领域技术人员可以容易地进行生产。