[发明专利]一种香米定性及定量的检测引物组、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.引物组，其特征在于，所述引物组选自SEQ NO:1-5所示的序列中的二条或以上。

2.权利要求1所述的引物组在如下(A1)或(A2)中的应用：

(A1)在香米定性及定量中的应用；

(A2)在制备香米定性及定量的检测试剂或检测试剂盒中的应用。

3.一种检测试剂和/或检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括2×PCRMaster Mix、阴性对照和阳性对照。

5.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括2×SYBRqPCR Master Mix、阴性对照和阳性对照。

6.根据权利要求4或5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为非香米的基因组DNA，如粤优938。

7.根据权利要求4或5所述的香米定性及定量的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为香米的基因组DNA，如稻花香2号。

8.权利要求3-7任一所述的检测试剂和/或检测试剂盒在香米定性及定量中的应用。

9.一种香米定性的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物组进行检测，所述方法包括如下步骤：

步骤S1：提取基因组DNA；

步骤S2：针对香米引物和非香米引物分别配制20μL反应体系：其中含有初始浓度为10μM的正向引物和反向引物0.1-1.0μL，2×PCR Master Mix 10μL，模板DNA 2μL，用ddH₂O补齐到20μL；

步骤S3：荧光定量PCR反应：

1)95℃预变性30s；

2)在95℃反应10s，60-66℃条件扩增延伸反应30s，30-40个循环；

步骤S4：在110-130V恒压条件下，1％琼脂糖凝胶电泳15min，香米引物对应的反应体系中，如果出现PCR扩增产物条带，则说明样品中含有香米；非香米引物对应的反应体系中，如果出现PCR扩增产物条带，则说明样品中含有非香米。

10.一种香米定量的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物组进行检测，所述方法包括如下步骤：

步骤S1：提取基因组DNA；

步骤S2：针对内参引物、香米引物和非香米引物分别配制20μL反应体系：其中含有初始浓度为10μM的正向引物和反向引物0.1-1.0μL，2×SYBR qPCR Master Mix 10μL，模板DNA2μL，用ddH₂O补齐到20μL；

步骤S3：荧光定量PCR反应：

1)95℃预变性30s；

2)在95℃反应10s，60-66℃条件扩增延伸反应30s，总共30-40个循环，在每个循环的延伸反应结束后采集荧光信号；

3)95℃条件下反应15s，60℃反应60s，其后以1％速率升至95℃反应15s；

步骤S4：步骤S3反应完成后，读取各反应孔的CT值，利用2^-△△CT法分别计算香米含量和非香米含量，从而达到对样品中香米定量目的。