[发明专利]一种重组人源化17型胶原多肽及其制备方法

权利要求书

1.一种重组人源化17型胶原多肽，其特征在于，所述胶原多肽选自：

（1）人17型胶原的胞内区氨基酸，胞内区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（2）包含有人17型胶原的胞内区氨基酸的序列，98%氨基酸序列同源性；

（3）对SEQ ID NO.2进行氨基酸序列优化，选择序列中脯氨酸含量为5.4%，赖氨酸含量为6.3%，富含(G-X-Y)n的结构，其中G为Gly，X代表Pro，Y代表Lys，n代表多次重复。

2.根据权利要求1所述的重组人源化17型胶原多肽，其特征在于还包括用于蛋白鉴定和纯化的组氨酸标签、硫氧还蛋白标签或类泛素蛋白修饰分子标签。

3.根据权利要求1所述的重组人源化17型胶原多肽，其特征在于所述胶原多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.含有权利要求1所述的重组人源化17型胶原多肽的重组载体，其特征在于，所述重组载体的基础载体为pET28a。

5.含有权利要求4所述重组载体的工程菌，其特征在于所述宿主菌为 BL21（DE3）、Origami（DE3）或BL21 Star Plyss（DE3）。

6.权利要求1所述重组人源化17型胶原多肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）人源化17型胶原多肽氨基酸序列参照SEQ ID NO.1进行选取，选择其1-460氨基酸；

（2）根据大肠杆菌密码子偏好对编码该人源化17型胶原多肽的DNA序列进行优化并基因合成；

（3）将步骤（2）合成的基因序列连入限制性内切酶酶切后的pET28a线性化载体，构建重组表达质粒pET28a-rhC17ICD；

（4）将步骤（3）构建的重组质粒pET28a-rhC17ICD导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，进一步提取重组质粒pET28a-rhC17ICD多克隆拷贝；

（5）通过步骤（4）获得重组质粒多克隆拷贝并导入大肠杆菌BL21感受态细胞，构建能表达和生产重组人源化17型胶原多肽的工程菌；

（6）对步骤（5）构建的工程菌进行诱导表达；然后利用Ni 柱亲和层析和分子筛联用分离纯化目的蛋白；

（7）纯化后的人源化17型胶原多肽经微孔滤膜过滤。