[发明专利]一种鸡滑液支原体间接ELISA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种鸡滑液囊支原体抗原蛋白MS-eLPD在制备鸡滑液支原体间接ELISA检测试剂盒的应用，其特征在于：所述鸡滑液囊支原体抗原蛋白MS-eLPD的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，分子量为54kD。

2.一种鸡滑液支原体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的鸡滑液囊支原体抗原蛋白MS-eLPD作为包被抗原的酶标板。

3.根据权利要求2所述的鸡滑液支原体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括包被缓冲液、封闭液、洗涤液、鸡滑液支原体阳性血清、鸡滑液支原体阴性血清、酶标二抗、底物显色液和终止液。

4.根据权利要求3所述的鸡滑液支原体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为pH值为7.4、浓度为0.01mol/L的碳酸盐缓冲液；所述封闭液是由浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的磷酸缓冲液与Tween 20以及胎牛血清BSA混合构成，所述封闭液中Tween 20的体积浓度为0.1%、胎牛血清BSA的质量浓度为5%；所述洗涤液是由浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的磷酸缓冲液与Tween 20混合配制而成，所述洗涤液中Tween 20的体积浓度为0.1%；所述酶标二抗为HRP标记的兔抗鸡二抗；所述底物显色液为TMB底物显色液；所述终止液为浓度为2mol/L的H₂SO₄溶液。

5.根据权利要求4所述的鸡滑液支原体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的使用方法如下：

（1）酶标板抗原包被：用包被缓冲液稀释鸡滑液囊支原体抗原蛋白MS-eLPD至0.5μg/ml，按100μl/孔加入酶标板中，4℃孵育过夜，洗涤液洗板3次、每次5min，拍干；

（2）酶标板封闭：包被好的酶标板每孔加入200μl封闭液，37℃封闭2h，洗涤液洗板3次、每次5min，拍干；

（3）加入稀释后的血清：加入经洗涤液按1:100倍稀释的待检血清100μl/孔，以经洗涤液按1:100倍稀释的鸡滑液支原体阳性血清、鸡滑液支原体阴性血清分别作阳性、阴性对照，37℃作用30min，洗涤液洗板3次、每次5min，拍干；

（4）加入稀释后的酶标二抗：每孔加入100μl经洗涤液1：2000倍稀释的酶标二抗，37℃作用60min，洗涤液洗板3次、每次5min，拍干；

（5）加入底物显色：每孔加入100μl TMB底物显色液，37℃避光显色5min；

（6）加入终止液完成检测：每孔加入50μl终止液，15min内在酶标仪上测OD₄₅₀值；待检血清OD₄₅₀值等于或者高于0.2785判断为阳性，低于0.2785判为阴性。