[发明专利]miR-183-5p抑制物在制备神经干细胞分化的促进药物中的应用

说明书

本发明公开了miR‑183‑5p抑制物在制备神经干细胞向神经元分化的促进药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明采用miRNA抑制物对miR‑183‑5p的表达进行下调，以miR‑NC作为对照，将携带有miR‑183‑5p抑制物和对照miR‑NC的慢病毒分别感染神经干细胞后进行筛选，得到稳定低表达和正常表达miR‑183‑5p的神经干细胞系，体外分化培养，观察两种情况下神经元分化情况。结果显示，miR‑183‑5p抑制物在体外能促进神经干细胞向神经元分化（P0.05），低表达miR‑183‑5p能明显促进神经干细胞向神经元分化（P0.05）。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及miR-183-5p抑制物在制备神经干细胞向神经元分化的促进药物中的应用。

背景技术

中枢神经系统各种退行性病变的主要病理特征就是功能神经元的丢失，如何能够恢复这部分丢失的神经元一直是中枢神经系统再生的难点和热点。目前的策略主要集中在两个方面：一方面就是采用各种保护方法延缓或减多少功能神经元的丢失，另一个方面就是细胞替代策略。前者在研究疾病发病机制的基础上，通过药物或基因干预手段来保护神经元的丢失，后者则是期望通过促进体内神经元再生或通过移植的方法从而达到替代缺失神经元的目的。但是在细胞替代治疗策略中，如何促进神经干细胞（neural stem cells，NSCs）向神经元分化一直是亟待解决的难题，这也是限制这一治疗策略应用的主要原因。

微小RNA（micro RNAs，miRNAs）是包含约1825个核苷酸的非编码单链小分子RNA，调节基因转录后的表达。它们分布广泛，在组织和所有体液中均有分布，包括血浆、血清、尿液、唾液以及脑脊液等。其稳定性高，在血液中和脑脊液中通过脂质体或脂蛋白运输，很少被降解。几乎参与全身所有的生理过程，包括神经元的发生、学习、记忆过程，从而与中枢神经系统退行性疾病有着密切的关联。

因此，若能找到影响神经干细胞向神经元分化的关键microRNA，则可能成为神经元替代疗法的新靶点，为中枢神经系统各种退行性病变的治疗带来突破。

发明内容

本发明的目的是提供miR-183-5p抑制物在制备神经干细胞向神经元分化的促进药物中的应用。

DCX是一种微管相关蛋白，在迁移的有丝分裂后的神经元前体中广泛表达，参与神经元分化的关键蛋白，是神经元前体细胞的主要标志物。本发明通过应用在线软件targetscan（http://www.targetscan.org）分析和预测调控DCX mRNA上游miRNAs，筛选得到miR-183-5p（3’ UCACUUAAGAUGGUCACGGUAU5’），从而推测miR-183-5p参与了神经干细胞向神经元分化过程。

本发明采用miRNA抑制物对miR-183-5p的表达进行下调，以miR-NC作为对照，将携带有miR-183-5p抑制物和对照miR-NC的慢病毒分别感染神经干细胞后进行筛选，得到稳定低表达和正常表达miR-183-5p的神经干细胞系，体外分化培养，观察两种情况下神经元分化情况。结果显示，miR-183-5p抑制物在体外能促进神经干细胞向神经元分化（ P0.05），低表达miR-183-5p能明显促进神经干细胞向神经元分化（ P0.05）。

附图说明

图1为分化培养后DCX免疫荧光检测结果。其中：A为神经干细胞转染miR-NC或miR-183-5p抑制物分化培养72小时的DCX免疫荧光实验结果，Hoechst染核，标尺=25微米； B为DCX阳性神经元前体细胞比例的统计（均值±标准差，a vs. Control group， P0.001；bvs.miR-NC group， P0.001）。