[发明专利]一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种乳糖不耐受症检测试剂盒及使用方法，所述试剂盒包括检测待测样品的测试盒和检测对照品的对照盒，所述测试盒由带有进样孔的上层卡壳、带有反应槽的下层卡壳、反应垫构成；所述反应垫吸附有5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚‑β‑D‑半乳糖苷；所述反应垫的尺寸与反应槽匹配，所述反应垫覆盖反应槽底部；所述上层卡壳与下层卡壳匹配围成一个中空盒体，所述进样孔与反应槽的中心对应；所述对照盒的结构与测试盒相同。本发明直接检测粪便中β‑半乳糖苷酶的浓度，进而判断乳糖不耐受症；灵敏度高，特异性强，不需要提前预约手术时间和长时间等待检测结果，检测时间明显缩短。

(一)技术领域

本发明涉及一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其应用，该试剂盒检测人体粪便中β-半乳糖苷酶，应用于筛查或辅助诊断乳糖不耐受症。

(二)背景技术

中国人群普遍存在乳糖酶缺乏症，继而容易表现出乳糖不耐受的症状。乳糖不耐受症除了引起腹部不适、腹胀、腹痛、腹泻等消化道症状外，还可能造成人体营养吸收不良。

目前临床上诊断乳糖不耐受症常用方法有三种，一是通过小肠活检来检测乳糖酶的活性，但是会有创伤(对小肠有损害性)问题；二是临床诊断法，依据患者在饮用牛奶后出现腹泻腹痛等现象判断其为乳糖不耐受症患者，结果容易受个人主观影响，存在结果不可靠、灵敏度差问题；三是呼氢实验，需要专门的仪器检测，操作繁琐。

现有方法中，小肠活检来检测乳糖酶的活性方法为：将从小肠中取出的粘膜组织加适量的生理盐水，在冰浴中用玻璃匀浆器匀浆化，匀浆液经稀释后加入底物溶液。由测定乳糖酶分解乳糖产生的葡萄糖的量来推算酶活性，一个酶活性单位(U)为水解1μmol乳糖/分·37℃，表示为U/g蛋白。葡萄糖的测定用葡萄糖氧化酶——过氧化酶法。蛋白测定为Lowry氏法，采用人血清白蛋白作蛋白标准液。通过直接测出粘膜乳糖酶活性来判断，当粘膜的乳搪酶活性低于13U/g蛋白，则被判断为乳糖不耐受症。

因此，寻找更加快速有效的检测方法并应用于临床检测乳糖不耐受症患者具有重要意义。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种乳糖不耐受症检测试剂盒及其使用方法，通过试剂盒检测粪便样品与对照样品的颜色，通过与对照品的显色程度不同，结合临床诊断来判断乳糖不耐受症；该检测试剂盒无需专门仪器，操作简单，可以快速的辅助检测出乳糖不耐受症患者；解决现有方法中结果不准确、实验创伤性大(造成小肠损伤)、操作繁琐等问题。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种乳糖不耐受症检测试剂盒，所述试剂盒包括检测待测样品的测试盒(6)和检测对照品的对照盒，所述测试盒(6)由带有进样孔(1)的上层卡壳(4)、带有反应槽(3)的下层卡壳(5)、反应垫(2)构成，所述反应垫(2)的尺寸与反应槽(3)匹配，所述反应垫(2)覆盖反应槽(3)底部；所述上层卡壳(4)与下层卡壳(5)匹配围成一个中空盒体，所述进样孔(1)与反应槽(3)的中心对应；所述对照盒的结构与测试盒相同；所述反应垫吸附有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)。

优选的，所述反应垫(2)按如下方法制备：滤纸做载体，放入0.065-20mg/mL的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，4℃浸泡2小时，60℃干燥1小时，获得所需的反应垫(2)。

更优选，所述滤纸为7cm定性滤纸，用打孔器切成的圆片。

优选的，所述X-gal的DMF溶液的浓度为1mg/mL。

优选的，所述对照品为0.6～100U/μL的β-半乳糖苷酶酶液，溶剂为含0.5M NaCl、0.5M咪唑的pH7.0的20mM磷酸钠缓冲液；所述β-半乳糖苷酶液的制备已在中国专利申请CN202211511049.4中公开；更优选所述对照品的酶浓度为1.2U/μL。