[发明专利]一株重组毕赤酵母基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株重组毕赤酵母基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌通过在出发毕赤酵母菌中过表达絮凝基因PAS_FragB_0067得到，其中，出发毕赤酵母菌为能够产木聚糖酶的毕赤酵母表达菌Komagataella phaffii GS115-xyn，所述絮凝基因PAS_FragB_0067的NCBI登录号为XM_002490834.1。

2.根据权利要求1所述重的组毕赤酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）以毕赤酵母表达菌Komagataella phaffii GS115-xyn为模板，利用PCR扩增PAS_FragB_0067基因片段；

（2）将步骤（1）获得的PAS_FragB_0067基因片段克隆到表达质粒上，得到重组质粒；

（3）将步骤（2）获得的重组质粒线性化后转化至毕赤酵母感受态细胞中，筛选得到重组毕赤酵母基因工程菌，将其命名为0067*。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，通过在含有Zeocin的酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基抗性平板上筛选得到重组毕赤酵母基因工程菌。

4.权利要求1所述的重组毕赤酵母基因工程菌在生物膜固定化发酵中的应用。

5.权利要求1所述的重组毕赤酵母基因工程菌在发酵生产木聚糖酶中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述重组毕赤酵母基因工程菌通过固定发酵的方式产木聚糖酶。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，向含有固定化载体的发酵培养基中接入重组毕赤酵母基因工程菌的菌泥，发酵，得到木聚糖酶酶液，其中，在发酵过程中加入甲醇诱导木聚糖酶的表达。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述固定化载体为棉纤维织物、无纺布、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、沸石、细菌纤维素膜、丝绸、甘蔗渣和玉米秸秆中的任意一种或几种的组合，固定化载体的用量为2-80 g/L发酵培养基。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，重组毕赤酵母基因工程菌种子液离心所得；所述发酵培养基的组分为：蛋白胨10-30 g/L、酵母粉5-15 g/L、无氨基酵母氮源10-20g/L、磷酸氢二钾0.1-1 g/L、磷酸二氢钾1-5 g/L、生物素0.1-5 mg/L，溶剂为水。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，发酵培养条件为：28-30℃，200-300 rpm条件下培养3-5d，发酵过程中每24 h加入甲醇，甲醇的加入量为发酵培养基体积的0.1-2%。