[发明专利]血清4型禽腺病毒100K蛋白单克隆抗体10E12-E6-D12-F5的制备及应用

说明书

本发明公开了血清4型禽腺病毒100K蛋白单克隆抗体10E12‑E6‑D12‑F5的制备及应用。本发明提供了分泌FADV4抗体的杂交瘤细胞株10E12‑E6‑D12‑F5，其保藏号为CCTCC NO:C2022101。本发明还提供了由所述杂交瘤细胞株10E12‑E6‑D12‑F5分泌的抗体及其应用。本发明成功研制了分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞10E12‑E6‑D12‑F5。其中，10E12‑E6‑D12‑F5这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，能特异地与I群禽腺病毒所有血清型以及本实验室保存的另外18株FAdV‑4分离株产生阳性反应，具有更广泛的识别谱。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种血清4型禽腺病毒100K蛋白单克隆抗体10E12-E6-D12-F5的制备及应用。

背景技术

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是引起高致病性和高传染性心包积液肝炎综合征的病原，感染的家禽出现急性死亡，病死率为20％-80％。FAdV-4感染能够导致宿主免疫抑制，由此导致的免疫失败、继发感染、混合感染进一步加剧了心包积液肝炎综合征的危害。2015年以前，该病在我国多地零星发现，但自2015年6月起，该病在我国河南、河北、安徽、山东、广东、广西和江苏等多个省份呈暴发式流行。

据报道，2015年后我国流行的FAdV-4毒株毒力显著增强，被定义为新型的FAdV-4，遗传进化分析其与国外的FAdV-4毒株(包括非致病株ON1和KR5，致病株MX-SHP95)不在同一分支，其基因组的右端均出现1 966bp的缺失(包括ORF19、ORF48和ORF27基因的缺失)，主要结构蛋白Hexon、Penton和Fiber的氨基酸位点存在多处突变(与毒株毒力相关)，但100K基因的遗传变异情况没有相关的分析报道。

目前对于FAdV-4单克隆抗体的研究，均以penton、Fiber 2和Hexon这三个主要的结构蛋白为免疫原研制的。王萍等(2018)以FAdV-4全病毒免疫小鼠后，以Fiber-2原核表达产物为筛选抗原研发Fiber-2单克隆抗体，该单克隆抗体与FAdV-4反应为阳性，FAdV-8为阴性，其它血清型的FAdV的反应性未确定。刘娜等(2018)用Fiber-2和Hexon蛋白筛选单克隆抗体并研制胶体金试纸，该单克隆抗体与FAdV-4反应为阳性，其它血清型的FAdV的反应性未确定。侯力丹等(2022)将penton基因的原核表达蛋白为抗原免疫小鼠，筛选制备了penton单克隆抗体，该单克隆抗体可识别I群禽腺病毒的所有血清型代表毒株。

100K蛋白是FAdV-4的非结构蛋白，在病毒感染后期大量表达，能促进Hexon蛋白正确折叠，在病毒的感染和复制过程中发挥重要作用。以100K重组蛋白或单克隆抗体建立的血清学检测方法，可区分FAdV-4病毒感染和灭活苗免疫产生的抗体，对于FAdV-4的净化有技术支撑作用。目前还未见100K蛋白单克隆抗体的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供血清4型禽腺病毒100K蛋白单克隆抗体10E12-E6-D12-F5的制备及应用。

第一方面，本发明提供了分泌FADV4抗体的杂交瘤细胞株10E12-E6-D12-F5，其保藏号为CCTCC NO:C2022101。

第二方面，本发明提供了由第一方面所述杂交瘤细胞株10E12-E6-D12-F5分泌的抗体。

上文所述抗体为单克隆抗体。

第三方面，本发明提供了第二方面所述抗体在如下任一种的应用：

1)制备检测或辅助检测禽腺病毒产品；

2)制备检测或辅助检测待测样本是否含有禽腺病毒的产品；

3)制备结合FAdV4-100K蛋白的产品；

4)制备结合禽腺病毒的产品。