[发明专利]免标记荧光检测巨噬细胞的动态的方法

说明书

本发明涉及巨噬细胞光学检测技术领域，具体而言，涉及免标记荧光检测巨噬细胞的动态的方法。免标记荧光检测巨噬细胞的动态的方法包括：选择能激发脂褐素红端荧光的激发光，照射样品，得到荧光光谱图、荧光成像图和荧光寿命图中的至少一种结果，而后根据所述结果判断巨噬细胞的动态。该方法能够在不额外添加荧光探针标记巨噬细胞的基础上，能够快速准确的检测巨噬细胞的空间位置、增值、分化、激活、迁移和极化等巨噬细胞的动态。

技术领域

本发明涉及巨噬细胞光学检测技术领域，具体而言，涉及免标记荧光检测巨噬细胞的动态的方法。

背景技术

巨噬细胞是先天性免疫细胞，广泛分布在结缔组织和各种实质器官中。它们具有很强的识别和杀死病原体的能力，以及摄取、处理和呈现抗原的能力。根据现处微环境的刺激，它们可以分化成两个具有不同功能特征的亚群：经典激活的巨噬细胞(M1型)和交替激活的巨噬细胞(M2型)。M1巨噬细胞作为促炎细胞，通过释放促炎细胞因子和溶酶体酶参与清除病原体，但也会造成组织和器官损伤。M2巨噬细胞具有抗炎和免疫调节功能，有助于炎症消退和组织修复。M1/M2动态失衡在不同疾病中的作用，如癌症和糖尿病，已引起越来越多的关注。因此，越来越需要开发一种能够动态监测巨噬细胞的技术。

但是现有技术中监测巨噬细胞的技术一般是添加具有荧光特定的染料及其类似物形成的荧光探针，例如，CN105492905B：炎症性疾病的荧光成像就是通过将染料与免疫细胞的蝶呤衍生物配体共轭，继而靶向荧光成像。又例如，US9201014B2中利用体内成像的光稳定的近红外(NIR)区域氰化物染料对巨噬细胞进行检测，可见，现有的专利对巨噬细胞的示踪等都需要额外添加荧光探针，即需要对巨噬细胞进行标定，继而才能进行示踪或监测，这种方法操作复杂，且检测成本高。现有技术中缺少一种不额外添加荧光探针，即不用对巨噬细胞进行标定便能监测巨噬细胞动态的方法。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供免标记荧光检测巨噬细胞的动态的方法。本发明实施例提供的方法能够在不额外添加荧光探针标记巨噬细胞的基础上，能够快速准确的检测巨噬细胞的空间位置、增值、分化、激活、迁移和极化等巨噬细胞的动态。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种免标记荧光检测巨噬细胞的动态的方法，包括：选择能激发脂褐素红端荧光的激发光，照射样品，得到荧光光谱图、荧光成像图和荧光寿命图中的至少一种结果，而后根据所述结果判断巨噬细胞的动态。

在可选的实施方式中，所述激发光的波长为960-1100nm。

在可选的实施方式中，所述巨噬细胞的动态包括巨噬细胞的空间位置、增值、分化、激活、迁移和极化中的至少一种。

在可选的实施方式中，所述巨噬细胞的动态包括区分巨噬细胞的M1型和M2型。

在可选的实施方式中，区分所述巨噬细胞的亚型的包括：选择能激发脂褐素红端荧光的激发光，照射样品，得到荧光光谱图或荧光成像图，而后该结果判断巨噬细胞的位置，然后，再利用能激发内源性荧光基团的激发光照射样品，得到荧光寿命图或荧光成像图，而后根据所述荧光寿命图或所述荧光成像图判断巨噬细胞的亚型；

其中，所述内源性荧光基团包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐、黄素、卟啉、胆红素、视黄醇和黑色素中的任意一种。

在可选的实施方式中，所述巨噬细胞是常驻或循环的巨噬细胞。

在可选的实施方式中，所述巨噬细胞包括脂肪组织巨噬细胞、肿瘤相关巨噬细胞、小胶质细胞、Kupffer细胞、肺泡巨噬细胞、朗格汉斯细胞和破骨细胞中的任意一种。

在可选的实施方式中，所述脂褐素由含有脂肪的残存物与溶酶体消化物组成。

在可选的实施方式中，判断所述巨噬细胞的动态之前，对结果进行分析处理。