[发明专利]一种吉氏巴贝斯虫特异性诊断抗原及其应用

说明书

本发明公开了一种吉氏巴贝斯虫特异性诊断抗原及其应用。本发明所提供的吉氏巴贝斯虫特异性诊断抗原为氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白质。本发明利用其作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法，操作简单、快速高效，特异性好、敏感性高，重复性好，可用于检测犬吉氏巴贝斯虫感染情况，可检出血涂片与PCR无法检出的阳性样本，对于犬巴贝斯虫病的诊断以及防治具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种吉氏巴贝斯虫特异性诊断抗原及其应用。

背景技术

犬巴贝斯虫病是一种经硬蜱传播，由梨形虫目(Piroplasmida)、巴贝斯科(Babesiida)、巴贝斯属(Babesia)原虫寄生于犬的红细胞所引起的血液寄生虫病，是宠物临床上重要的疾病之一。巴贝斯虫可通过机械作用、引起宿主对寄生虫血症的强免疫应答从而破坏红细胞，使发病犬出现贫血、溶血、血小板减少、全身性炎症反应综合征等症状，并伴随有死亡风险。我国流行的虫种主要是吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)。

对犬巴贝斯虫病的诊断方法包括病原学、血清学和分子生物学等。病原学诊断包括血涂片染色检查、动物接种等。分子生物学诊断方法如聚合酶链式反应(PCR)、环介导等温扩增(LAMP)技术。血清学诊断方法主要有间接荧光抗体试验(IFAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等。

目前临床上对犬巴贝斯虫病的诊断以血涂片检查虫体为主，少数条件较好的医院具备PCR诊断的设备条件。血涂片检查技术虽然成熟、成本低廉、操作简单，但该方法对检验者的技术要求高，存在较高漏诊率，在早期感染和慢性感染阶段寄生虫血症低的时候难以检出，且难以应用于隐性感染、无症状携带犬和循环衰竭患犬。分子生物学技术的局限性在于筛查潜在携带者和其他无症状犬可能会出现假阴性结果，再加上其步骤繁琐、使用的试剂及仪器价格昂贵，难以普及到不同规模的宠物医院，或被应用于大规模筛查。实验室检查中IFAT是检测巴贝斯虫抗体的金标准，但容易出现交叉反应，且由于巴贝斯虫的体外培养难度较高，难以普及于临床诊断。间接ELISA是一种常被用于流行病学调查的血清学诊断方法，具有敏感性高、特异性好、便捷等特点，可用于染虫率较低的带虫免疫犬的检出和疫区流行病学的调查。

综上所述，建立一种具备高特异性、高灵敏度的间接ELISA方法对于我国犬巴贝斯虫病的诊断与筛查具有重要的意义。

发明内容

本发明要求保护一种吉氏巴贝斯虫特异性诊断抗原及其应用。

第一方面，本发明要求保护一种蛋白质。

本发明所要求保护的蛋白质可作为吉氏巴贝斯虫特异性诊断抗原，为吉氏巴贝斯虫BgSBP3蛋白的截短体，具体可为如下任一：

(A1)氨基酸序列为SEQ ID No.1的蛋白质；

(A2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

(A3)与(A1)-(A2)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；

(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

上述蛋白质中，所述标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为His标签、Flag标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。