[发明专利]一种昆虫细胞无血清培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种昆虫细胞无血清培养基及其应用，该培养基由氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、碳水化合物和其他分子化合物组成，不仅能够满足各种亚型昆虫细胞的培养需求，还能够有效提高AAV的表达量并降低空壳率，且可以维持更长时间更高活率的细胞状态，从而能够提高生产效率；该培养基价格低廉，从而可以降低生产成本，具有广泛的应用前景和价值。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体为一种昆虫细胞无血清培养基及其应用。

背景技术

昆虫细胞表达系统（杆状病毒表达系统），作为真核细胞系统，具有其独特的生物学特性，它是表达大片段DNA的理想载体，其重组蛋白也具有完整的生物学功能，相对于其他表达系统（如CHO等哺乳动物细胞），表达水平更高，能同时表达多个基因，且较低的免疫原性，不会引起炎症反应，故已应用于多个领域，如基因治疗及疫苗等方面的研究。如何快速、安全、有效且低成本开发适用性预防疫苗，成为一个阶段性的挑战。昆虫细胞表达系统能够快速获得高产的表达产物、对人体安全，并且极其适用于规模化放大生产，无疑是快速、安全且低成本生产新冠预防性疫苗的有效途径之一。

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是基因治疗领域应用最为广泛的载体，也是经过FDA认证的，对人体极其安全的生物载体。目前生产AAV的主流工具细胞，包括人源的HEK293和各种亚型的昆虫细胞。以HEK293作为AAV病毒的生产宿主，很难实现低成本的规模化生产，其多质粒瞬转的生产方法，极大的限制了工业化的生产规模（一般在500L以下，多数为200L），造成目前AAV相关疗法成本极高，特别是对于全身性用药的病症或者患者，治疗费用无法承担，临床可及性极差。而以昆虫细胞作为AAV病毒的生产宿主，可以有效解决上述弊端，其工业化放大生产规模可至数千升，且工艺较HEK293稳定可控，极大的压缩了AAV病毒生产成本，扩大了AAV相关疗法或者药物的临床可及性，以造福社会和广大患者。

以昆虫细胞作为AAV生产宿主，一个高表达的细胞系，搭配合适的培养基，对提高AAV病毒产量和方便后期相关质量的鉴定至关重要。而目前培养昆虫细胞的培养基，大多会添加5%甚至更多含量的血清，使其增加了很多的风险，也有一些进口培养基（如Gibco的SF900 III）或者国产培养基，虽然不添加血清，但依然含有少量水解物成分，且价格昂贵。

因此，昆虫细胞无血清培养基及其应用，是本行业目前研究的热点和痛点。

发明内容

针对上述问题，发明人开发了一种无任何动物性来源成分的、无蛋白的、化学成分明确的昆虫细胞无血清培养基，不仅能够满足各种亚型昆虫细胞的培养需求，还能够有效提高AAV的表达量并降低空壳率，且价格低廉。

本发明的目的在于提供一种昆虫细胞无血清培养基及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种昆虫细胞无血清培养基，由氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、碳水化合物和其他分子化合物组成；

所述氨基酸的各组分具体如下：L-精氨酸310-400mg/L、L-天冬氨酸910-1000mg/L、L-天冬酰胺600-750mg/L、L-组氨酸333-400mg/L、L-异亮氨酸535-750mg/L、L-亮氨酸621-700mg/L、L-赖氨酸452mg/L、L-蛋氨酸78-113mg/L、L-苯丙氨酸200-211mg/L、L-脯氨酸300-444mg/L、L-丝氨酸500-620mg/L、L-苏氨酸100-109mg/L、L-色氨酸300-361mg/L、L-酪氨酸420mg/L、L-缬氨酸500mg/L、L-胱氨酸200mg/L、L-丙氨酸20mg/L、L-谷氨酸300mg/L、L-谷氨酰胺400mg/L、甘氨酸11mg/L、还原型谷胱甘肽500mg/L；