[发明专利]一种标记19-去甲睾酮抗体的胶体金探针的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种标记19‑去甲睾酮抗体的胶体金探针的制备方法及其应用，所述制备方法包括以下步骤：S1.氯金酸与柠檬酸三钠按照用量比1：(2～6)充分反应，调节pH，即得到胶体金溶液；S2.将19‑去甲睾酮抗体与步骤S1所得胶体金溶液充分反应；S3.将牛血清白蛋白与步骤2所得产物充分反应后，离心，收集沉淀即得。本发明提供的标记19‑去甲睾酮抗体的胶体金探针和检测19‑去甲睾酮的免疫层析试纸条，并建立了相应的检测方法，仅需一次提取并稀释即可完成样品的前处理操作，不仅操作简单便捷，检测效率高，而且特异性好，灵敏度高，对猪尿和牛尿等样品中的19‑去甲睾酮裸眼检测限为0.7ng/mL，定量检测限为0.12ng/mL～0.45ng/mL，回收率为88.6％～106.6％，标准偏差为3.1％～11.1％。

技术领域

本发明涉及兽药残留检测技术领域，具体地，涉及一种标记19-去甲睾酮抗体的胶体金探针的制备方法及其应用。

背景技术

19-去甲睾酮(19NT)，又名诺龙，分子式为C18H16O2,分子量为274.40，是一种具有雄性激素功能特质的类固醇激素。19-去甲睾酮作为合成代谢雄激素类固醇、在临床上可以用作治疗男性性功能减退症，同时还有增加体重、肌肉大小，力量、蛋白质含量的功效。19-去甲睾酮能显著提高饲料利用率，促进猪牛的瘦肉生长和蛋白质合成，曾被用作生长促进剂在畜牧业中使用。由于其蓄积性强，易在肝、肾和其他器官残留堆积，影响原有的激素平衡，造成功能损伤。在我国农业农村部2019年发布了新的食品安全国家标准GB 31650-2019中明确规定了19-NT在禽畜产品中不得检出。因此，开发有效的快速检测19-去甲睾酮方法对监控畜禽食品质量安全尤为重要。

目前，针对19-去甲睾酮的检测方法有多种，包括含高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS)、超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)等在内的仪器分析方法、光谱检测法以及免疫分析法等。仪器方法灵敏度高、特异性强，但需要昂贵的设备、专业的操作人员和繁琐的样品前处理过程，不适合大量样本的快速筛查；免疫分析技术作为大型仪器验证分析的重要互补检测技术，已得到广泛发展，其中免疫层析方法以其简便快捷、可现场检测等优点，备受市场青睐。免疫层析法是将免疫和色谱层析技术相结合的检测方法，以标记物标记的抗体与目标待测物特异性结合为基础并通过标记物信号实现定性或定量的目的。该方法检测时间短，使用方便，前处理简单，成本低，检测效果能满足需求，适合用于食品样品的现场检测。

检测19-NT在食品样品中残留的免疫层析检测方法主要为仪器检测法，关于19-NT的胶体金免疫层析检测方报导较少，而且目前涉及的检测效果不佳，缺乏一种高灵敏度的单克隆抗体。因此，亟待开发一种针对猪尿、牛尿样品中19-NT药物残留的高灵敏度快速检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种标记19-去甲睾酮抗体的胶体金探针的制备方法及其应用。

本发明的第一个目的是提供一种标记19-去甲睾酮抗体的胶体金探针的制备方法。

本发明的第二个目的是提供上述制备方法制得的胶体金探针。

本发明的第三个目的是提供上述胶体金探针在制备检测19-去甲睾酮的试剂盒中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种检测19-去甲睾酮的系统。

本发明的第五个目的是提供一种检测19-去甲睾酮的试剂盒。

本发明的第六个目的是提供一种检测19-去甲睾酮的方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：