[发明专利]一种猫杯状病毒阳性血清及其制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种猫杯状病毒阳性血清及其制备方法。所述制备方法以豚鼠作为免疫动物，采用细胞的病毒液及FCV‑VP1亚单位疫苗作为猫杯状病毒抗原进行联合免疫。采用本发明所述工艺制备的猫杯状病毒阳性血清中和效价高达1：4096倍以上，本发明制备的猫杯状病毒阳性血清纯净性好，无菌、无支原体、无外源病毒污染，特异性好。同时，免疫动物为豚鼠，降低了成本，减少了用猫制备阳性血清因同源动物而引起的外源病毒污染风险。本发明制备的阳性血清可用于猫杯状病毒疫苗质量控制如特异性检验、鉴别检验和外源病毒检验以及诊断检测等用途。

技术领域

本发明属于生物技术和动物病毒学领域，尤其涉及一种猫杯状病毒阳性血清的制备及应用。

背景技术

猫嵌杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)曾属于小RNA病毒科杯状病毒属，国际病毒分类委员(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)1981年将其单独列为杯状病毒科。FCV具有高度传染性，其中在家猫的的感染率为32.85％，而在多猫环境中，例如流浪动物基地、猫舍等地，FCV感染率可达到40％。最早的FCV是1957年Fastier等在新西兰首次从猫病料中分离到的，主要在上呼吸道和口腔部位组织细胞中复制，引起眼鼻分泌物和口腔、鼻镜溃疡，发病率高但死亡率低，多为良性经过。FCV不断进化变异出毒力更强、组织噬性从上呼吸道扩散到下呼吸道的毒株。1998年以来，美国和欧洲相继出现以高死亡率及系列临床症状为特点的高毒性FCV毒株(VS-FCV)。2000年，Pedersen等分离的VS-FCV可引起猫严重全身性系统疾病，包括发热(40℃以上)、精神不振、呼吸道症状(眼鼻分泌物、口腔溃疡和结膜炎)、肺炎、脱毛、皮下水肿、不同程度的皮肤溃疡等症状，部分感染猫还会出现黄疸及病毒血症。近年来，我国也相继出现了FCV病例，从家猫身上分离出FCV。该病分布在我国从北到南多个地区，黑龙江、吉林、北京、河北、江苏、湖北、上海、广东、广西等多个省市均有发病报道。可见，FCV目前呈世界性分布，对世界和我国造成了严重的影响。

已发文章和专利中尚未有猫杯状病毒阳性血清制备方法的报道和专利，所涉及的猫杯状病毒阳性血清数据，多为猫免疫后的产生的抗体数据以及制备的卵黄抗体数据，但此种抗体效价低，且存在同源动物而引起同源其他外源病毒的污染，

发明内容

本发明通过对免疫程序的摸索，提供了一种针对猫杯状病毒高效价、高纯净性，特异性良好的阳性血清的制备工艺，所制备血清满足外源病毒检验、特异性检验等试验要求，以及为后期相关检测及预防产品的开发奠定了基础，对于兽用生物制品企业有重要的实际应用价值。

(一)要解决的技术问题

为了提升猫杯状病毒特异性阳性血清的效价，满足猫杯状病毒疫苗质量控制、诊断和预防技术需求，本发明提供了一种猫杯状病毒特异性阳性血清及其制备方法。

(二)技术方案

本发明首先提供了一种新的猫杯状病毒株,电镜观察病毒呈球形，无囊膜，粒子直径约为35nm左右，该分离株能够在F81细胞上增殖并产生典型的细胞病变。将该病毒进行蚀斑纯化并经细胞适应性传代，病毒滴度均不低于10^9.0TCID₅₀/ml，其分类命名为猫杯状病毒株,名称为FCV ZMV917，已于2023年1月6日保藏与中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.45385。

本发明又提供了所述猫杯状病毒株在制备猫杯状病毒特异性阳性血清中的应用。

本发明再提供一种猫杯状病毒特异性阳性血清的制备方法，包括以豚鼠作为免疫动物进行基础免疫，在进行基础免疫时，采用猫杯状病毒病毒液作为猫杯状病毒抗原进行基础免疫。

本发明发现，在按上述方案以豚鼠为免疫动物，可以较大地提升阳性血清的效价。