[发明专利]一种识别CD276-CAR分子的纳米抗体及其应用

说明书

本发明提供了一种识别CD276‑CAR分子的纳米抗体及其应用，所述纳米抗体的可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:12所示的CDR3。本发明所述识别CD276‑CAR分子的纳米抗体能够特异性识别CD276‑CAR‑T细胞上CD276‑CAR分子，与其他分子无交叉反应；所述识别CD276‑CAR分子的纳米抗体与CD276‑CAR分子的结合活性高，且采用所述纳米抗体对CD276‑CAR‑T细胞CAR转染阳性率检测的流式分析方法进行了开发和全面方法学验证，所述纳米抗体能准确、特异、灵敏地检测CD276‑CAR分子的转染效率，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种识别CD276-CAR分子的纳米抗体及其应用。

背景技术

CD276分子，又称为B7-H3分子，是一种I型跨膜糖蛋白，属于B7免疫共刺激和共抑制家族。B7-H3在正常人体组织中表达水平较低，但在人恶性肿瘤中高度表达，例如胃癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌和乳腺癌等，高表达的蛋白往往与癌症的不良预后密切相关。

最近的研究表明，B7-H3在肿瘤的生长、侵袭、迁移及血管生成和转移中起着重要作用，由于其在免疫逃逸中的作用，B7-H3已成为新的免疫治疗靶点。主要免疫治疗手段有：单抗、双抗、小分子、ADC药物、CAR-T治疗等。临床上进展较快的是MacroGenics公司的enoblituzumab单抗，及在此单抗基础上改造获得的B7-H3*CD3双抗(MGD009)，B7-H3-ADC药物(MGC018)等，Daiichi Sankyo公司的B7-H3-ADC药物(DS-7300a)。联合治疗方面，B7-H3和PD-L1对T细胞产生抑制作用，改变T细胞的微环境以逃避抗肿瘤免疫应答。而B7-H3和CTLA4也可能有协同作用，类似于B7-H3在PD-1通路中一样。

本领域技术人员还开发了CD276-CAR-T细胞靶向治疗CD276阳性恶性实体肿瘤的方法，但是，目前尚无一种非常特异的检测CD276-CAR的方法，无法准确检测CD276-CAR的转染效率，因此，提供一种能够准确检测CAR转染效率的抗体，在靶向治疗CD276阳性恶性实体肿瘤中具有重要的意义。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种识别CD276-CAR分子的纳米抗体及其应用。本发明所述识别CD276-CAR分子的纳米抗体能够特异性识别CD276-CAR-T细胞上CD276-CAR分子，与其他分子无交叉反应；所述识别CD276-CAR分子的纳米抗体与CD276-CAR分子的结合活性高，能准确检测CAR转染效率。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种识别CD276-CAR分子的纳米抗体，所述纳米抗体的可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:12所示的CDR3。

优选地，所述纳米抗体的可变区包括如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:10所示的CDR1。

优选地，所述纳米抗体的可变区包括如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:11所示的CDR2。

优选地，所述纳米抗体包括如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:9所示的VHH链。