[发明专利]检测不同类型真菌的组合物、试剂盒及其用途

说明书

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，涉及耶氏肺孢子虫、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、马尔尼菲篮状菌、新型隐球菌、白色念珠菌、组织胞浆菌的的联检并进行区分的组合物、方法和用途。本发明采用多重PCR技术及Qsep400高通量分析系统，将八个真菌扩增片段的长度至少差距20个碱基以上，达到目的片段能够精准区分的目的。在一管反应液中能同时检测耶氏肺孢子虫、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、马尔尼菲篮状菌、新型隐球菌、白色念珠菌、组织胞浆菌。一个样本，只需进行一次核酸提取和同时进行单管PCR扩增，在Qsep400上就能通过条带分析得到样本检测结果，且PCR过程无干扰，检测结果准确。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，涉及耶氏肺孢子虫、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、马尔尼菲篮状菌、新型隐球菌、白色念珠菌、组织胞浆菌的的联检并进行区分的组合物、方法和用途。

背景技术

近年来，随着广谱抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂的广泛使用，器官移植、各种侵袭性诊疗操作的广泛开展，特殊感染尤其是深部真菌感染越发多见，而肺部作为最易感部位，患病率在不断增加。同时，免疫健全人群的肺部真菌感染率也有逐年增加趋势。真菌感染常常继发与其他较严重的原发病，其临床表现形式大多以原发性疾病的症状而呈现，肺部真菌感染的临床症状表现为咳嗽、发热、呼吸困难等，不具有特异性，这对于肺部真菌感染的早期诊断具有较大难度，漏诊及误诊几率较大。常见的引起肺部感染的真菌有耶氏肺孢子虫、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、马尔尼菲篮状菌、新型隐球菌、白色念珠菌、组织胞浆菌等，但不同的肺部感染在发病机制、临床表现、严重程度以及预后方面都可能有所不同，但共同点在于难以鉴别诊断，且往往引起较为严重的感染，其预后较差，死亡率较高。

目前，真菌培养是现今临床诊断肺部真菌感染的“金标准”，但其培养周期较长、检出率低、易受污染可能导致假阳性率较高，并不适合作为一种常用临床检查手段。典型CT影像学可作为辅助诊断依据之一，需结合基础疾病初步诊断。除临床表现、病史、影像学资料外，肺部真菌感染的诊断主要依赖实验室病原学检测。目前最常见的分子生物学诊断方法是qPCR反应，它缩短了从采样到确诊所需的时间，但目前在真菌检测中应用相对较少，一个主要原因在于真菌的细胞壁较厚，常规方法下核酸提取困难，在灵敏度上受到很大的限制，也因此很难实现真正的高通量检测；另一个原因是它同样具有通量较低和假阳性率较高的劣势。

因此，本领域需求一种早期快速、准确的病原学诊断，是改善肺部真菌感染预后、降低死亡率的关键。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明提供一种检测并区分不同类型真菌的组合物，包括：

如SEQ ID NO:1～2所示的检测马尔尼菲篮状菌上下游引物；

如SEQ ID NO:3～4所示的检测黄曲霉上下游引物；

如SEQ ID NO:5～6所示的检测黑曲霉上下游引物；

如SEQ ID NO:7～8所示的检测烟曲霉的上下游引物；

如SEQ ID NO:9～10所示的检测新型隐球菌上下游引物；

如SEQ ID NO:10～12所示的检测白色念珠菌上下游引物；

如SEQ ID NO:13～14所示的检测组织胞浆菌上下游引物；以及

如SEQ ID NO:15～16所示的检测耶氏肺孢子虫上下游引物。