[发明专利]一种提取粪便微生物RNA的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种提取粪便微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括裂解缓冲液、杂质去除液和酸性单相缓冲液；

所述裂解缓冲液含有十六烷基三甲基溴化铵和十二烷基硫酸钠；

所述杂质去除液含有苯酚、氯仿和异戊醇；

所述酸性单相缓冲液含有胍盐、缓冲盐、N-月桂基氨酸、2-巯基乙醇和苯酚。

2.根据权利要求1所述的提取粪便微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述胍盐包括异硫氰酸胍和/或盐酸胍；

优选地，所述缓冲盐包括柠檬酸钠和/或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐。

3.根据权利要求1或2所述的提取粪便微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述裂解缓冲液中十六烷基三甲基溴化铵的质量或体积百分比为2％～10％；

优选地，所述裂解缓冲液中十二烷基硫酸钠的质量或体积百分比为0.5％～20％；

优选地，所述裂解缓冲液中还包括缓冲盐，所述缓冲盐包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钾或磷酸二氢钠或磷酸氢二钠中任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求1-3任一项所述的提取粪便微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述酸性单相缓冲液中胍盐的浓度为2～6M；

优选地，所述酸性单相缓冲液中缓冲盐的浓度为10～50mM；

优选地，所述酸性单相缓冲液中N-月桂基氨酸的浓度为0.2～10w/v％；

优选地，所述酸性单相缓冲液中2-巯基乙醇的浓度为0.01～0.2M；

优选地，所述酸性单相缓冲液中苯酚的体积百分比为10～50％。

5.根据权利要求1-4任一项所述的提取粪便微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括漂洗液缓冲液和/或核酸洗脱液；

优选地，所述漂洗液缓冲液包括乙醇；

优选地，所述核酸洗脱液包括焦碳酸二乙酯和/或无菌DEPC处理水。

6.权利要求1-5任一项所述的提取粪便微生物RNA的试剂盒在提取微生物RNA中的应用。

7.一种提取粪便微生物RNA的方法，其特征在于，所述方法使用权利要求1-5任一项所述的提取粪便微生物RNA的试剂盒进行提取，包括：

将含微生物的样本与裂解缓冲液和杂质去除液混合，收集上清液与酸性单相缓冲液混合，收集上清液，进行RNA沉淀处理，得到RNA。

8.根据权利要求7所述的提取粪便微生物RNA的方法，其特征在于，所述含微生物的样本包括粪便样本或动物肠道内容物。

9.根据权利要求7或8所述的提取粪便微生物RNA的方法，其特征在于，所述收集上清液的方法包括离心处理；

优选地，所述离心处理的条件为4～8℃、10000～18000g离心1～5min；

优选地，所述混合后还包括研磨处理的步骤；

优选地，所述沉淀处理的方法包括：将上清液与无水乙醇混合，收集沉淀；

优选地，所述沉淀处理后还包括洗涤处理的步骤；

优选地，所述洗涤处理包括将所述沉淀与漂洗液缓冲液混合，收集沉淀与核酸洗脱液混合。

10.根据权利要求7-9任一项所述的提取粪便微生物RNA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将含微生物的样本与裂解缓冲液和杂质去除液混合并进行研磨处理，离心收集上清液；

(2)将步骤(1)收集上清液与酸性单相缓冲液混合，离心收集上清液；

(3)将步骤(2)收集上清液与无水乙醇混合，离心收集沉淀；

(4)将步骤(3)收集沉淀与漂洗液缓冲液混合，离心收集沉淀与核酸洗脱液混合，得到RNA。