[发明专利]一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体

权利要求书

1.一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体，其特征在于：包括以下五个步骤：

步骤一：所述获取细胞分析，对需要进行检测的细胞进行p16分子序列进行分析，通过根据在检测的细胞内部细胞结构进行分解和检测，对细胞的抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构进行检测和分析；

步骤二：所述获得杂交瘤细胞系，经检测的细胞融合和重组p16筛选克隆，能够得到高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，培养备用；

步骤三：所述获得单克隆抗体，将杂交瘤细胞系用大鼠，先腹腔注射白变种实验室老鼠0.3～0.5ml降植烷或，将筛选出来的杂交瘤细胞株扩大培养后接种到白变种实验室老鼠腹腔内，通过离心分离，进行收集无色透明的中间层的腹水，；

步骤四：所述鉴定单克隆抗体的亚类，用酶联免疫吸附测定大鼠单克隆抗体的亚类为lgG1-lgG3与抗原形成免疫复合物单克隆抗体；

步骤五：所述免疫印迹，通过免疫印迹实验显示该抗体能特异识别重组p16蛋白和表达p16分子的肿瘤细胞。

2.根据权利要求1所述的一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述对需要进行检测的细胞进行p16分子序列进行分析，通过根据在检测的细胞内部细胞结构进行分解和检测，对细胞的抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构进行检测和分析，选择适宜的区域，既具有可溶性表达同时又具有良好免疫原性的区域用于载体送入受体细胞,使它们在受体细胞中增殖并表达细胞的性质进行重组表达，经基因合成后克隆进表达质粒载体融合蛋白类型原核高效表达载体中进行重组表达，分离纯化表达产物的可溶部分进行亲和纯化后作为免疫原。

3.根据权利要求1所述的一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述经检测的细胞融合和重组p16筛选克隆，能够得到高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，将细胞系导入至培养器皿中进行培养，在培养器皿内部加入培养液、血清及试剂等营养物质，使细胞能够进行储存和备份，通过细胞增殖使细胞分裂和滋生。

4.根据权利要求1所述的一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述将杂交瘤细胞系用大鼠，先腹腔注射白变种实验室老鼠0.3～0.5ml降植烷或，将筛选出来的杂交瘤细胞株扩大培养后接种到白变种实验室老鼠腹腔内，后续对小鼠进行一次性腹水的提取，通过离心分离，进行收集无色透明的中间层的腹水，亲和层析纯化腹水，获得大鼠单克隆抗体。

5.根据权利要求1所述的一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述用酶联免疫吸附测定大鼠单克隆抗体的亚类为lgG1-lgG3与抗原形成免疫复合物单克隆抗体。

6.根据权利要求1所述的一种与p16蛋白特异性结合的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述通过免疫印迹实验显示该抗体能特异识别重组p16蛋白和表达p16分子的肿瘤细胞。