[发明专利]β-丙氨酸连接酶突变体及其应用

权利要求书

1.Uniprot ID为B0BTG0的氨基酸连接酶的突变体，其特征在于，突变位点包括：

第13位氨基酸残基突变为精氨酸；和/或

第87位氨基酸残基突变为甘氨酸；和/或

第91位氨基酸残基突变为异亮氨酸；和/或

第239位氨基酸残基突变为苏氨酸；和/或

第317位氨基酸残基突变为甲硫氨酸。

2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，突变位点还包括：

第170位氨基酸残基突变为苏氨酸；和/或

第192位氨基酸残基突变为天冬酰胺；和/或

第287位氨基酸残基突变为亮氨酸。

3.如权利要求2所述的突变体，其特征在于，具有：

(1)、如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；或

(2)、如(1)所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个残基获得的氨基酸序列，且功能与(1)的相同或相似；或

(3)、与如(1)或(2)所示的氨基酸序列至少有70％同源性的氨基酸序列；

所述多个为2个至60个。

4.编码如权利要求2或3所述的突变体的核酸分子，其特征在于，具有：

(4)、如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；或

(5)、如(4)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且功能与(4)的相同或相似；或

(6)、与如(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有80％同源性的核苷酸序列；

所述多个为2个至200个。

5.表达载体，其特征在于，包括如权利要求4所述的核酸分子，以及可接受的基因元件。

6.宿主细胞，其特征在于，包括如权利要求4所述的核酸分子或如权利要求5所述的表达载体。

7.组合物，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的突变体和三磷酸腺苷。

8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，还包括多聚磷酸激酶和多聚磷酸；

所述多聚磷酸包括偏六磷酸。

9.如下任意项在β-丙脯二肽合成中的应用：

(i)、如权利要求1至3任一项所述的突变体；

(ii)、如权利要求4所述的核酸分子；

(iii)、如权利要求5所述的表达载体；

(iv)、如权利要求6所述的宿主细胞；

(v)、如权利要求7或8所述的组合物。

10.β-丙脯二肽的制备方法，其特征在于，包括：

(a)、取原料与如权利要求1至3任一项所述的突变体混合，获得所述β-丙脯二肽；或

(b)、表达如权利要求4所述的核酸分子，取获得的蛋白产物与原料混合，获得所述β-丙脯二肽；或

(c)、表达如权利要求5所述的表达载体，取获得的蛋白产物与原料混合，获得所述β-丙脯二肽；或

(d)、培养如权利要求6所述的宿主细胞，取获得的蛋白产物与原料混合，获得所述β-丙脯二肽；或

(e)、取原料与如权利要求7或8所述的组合物混合，获得所述β-丙脯二肽；

所述原料包括β-丙氨酸和L-脯氨酸。