[发明专利]一种噻虫啉新型识别元件全长重组抗体制备及其在时间分辨荧光试纸条中的应用

说明书

本发明公开了一种噻虫啉新型识别元件全长重组抗体制备及其在时间分辨荧光试纸条中的应用，属于分子生物学技术和时间分辨免疫分析快速检测技术领域。本发明提供了一种噻虫啉半抗原和完全抗原的制备方法以及噻虫啉全长抗体重链和轻链的序列，抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。本发明试纸条检测噻虫啉的方法简单快速，稳定可靠且灵敏度高，适合大量样本的的筛查和现场监控，具有良好的商业化应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术和时间分辨免疫分析快速检测技术领域，具体涉及一种噻虫啉新型识别元件全长重组抗体制备及其在时间分辨荧光试纸条中的应用。

背景技术

新烟碱类杀虫剂在世界范围内广泛使用，它们与昆虫体内的烟碱乙酰胆碱受体结合，引起昆虫异常兴奋并通过抽搐性麻痹而死亡。新烟碱类杀虫剂广泛存在于土壤、自来水、水果、蔬菜和谷物中，极大地增加了人类污染的风险。接触新烟碱类杀虫剂会导致不良的健康影响，如癌症、慢性病、出生缺陷和不孕不育。噻虫啉(Thiacloprid,TCL)作为新烟碱类杀虫剂的代表品种之一，是一种相对极性的农药，更容易渗透到土壤深处，污染地下水，不可避免地进入食物链，对公众健康构成威胁。目前,国内水果中的最大残留限量(MRLs)为0.2-1mg/kg，蔬菜中的最大残留限量为0.02-2mg/kg(GB 2763-2021)。因此，迫切需要建立一种快速、灵敏、准确的检测方法。

食品样品中的噻虫啉残留已经通过仪器方法，如色谱法和质谱法进行检测。然而，这些方法需要昂贵的大型仪器和复杂的样品制备过程，不适合现场快速检测。免疫分析方法不需要昂贵的仪器，检测成本低。抗体是免疫分析的核心要素，负责识别分析物，抗体的特异性和灵敏度在免疫检测中起着关键作用。目前市面上应用到免疫检测中的抗体，主要是单克隆抗体，与多克隆抗体相比，单克隆抗体特异性更好。但是由于动物免疫功能的复杂性，很难消除抗体的批间差异性。现在亟需一种检测噻虫啉的重组抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种噻虫啉半抗原、完全抗原、全长重组抗体的制备方法以及利用时间分辨荧光探针快速灵敏检测噻虫啉的免疫层析试纸条。本发明基于哺乳动物表达系统制备全长重组抗体，采用荧光微球替代传统胶体金，用荧光微球与全长重组抗体偶联制备荧光探针用于免疫层析，通过读取荧光免疫分析仪上检测线的荧光值，可以对果蔬样品中的噻虫啉进行快速定量分析。

本发明提供一种噻虫啉半抗原，所述噻虫啉半抗原的结构式如式I所示：

本发明提供一种上述的噻虫啉半抗原的制备方法，将噻虫啉原药与巯基丙酸在碱性条件下进行取代反应，随后进行酸化反应，分离纯化后，即得式I所示噻虫啉半抗原。

本发明提供一种噻虫啉完全抗原，所述噻虫啉完全抗原的结构式如式Ⅱ所示：

其中，protein为载体蛋白。

本发明提供一种上述的噻虫啉完全抗原的制备方法，通过碳二亚胺法将式I与载体蛋白偶联，得到所述噻虫啉完全抗原。

一种噻虫啉全长重组抗体，所述抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。所述抗体重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述抗体轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

在一种实施方式中，抗体重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，抗体轻链的可变区核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明一种含有编码上述噻虫啉全长重组抗体的基因的重组载体。

本发明一种携带上述的重组载体的细胞。