[发明专利]一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR-novel-1007及其应用

说明书

本发明提供了一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR‑novel‑1007及其应用，属于干扰RNA技术领域。本发明提供的靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR‑novel‑1007的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。miR‑novel‑1007是通过结合GTF2IRD1基因的3'UTR区域来实现GTF2IRD1基因表达的负调控作用。由于过表达GTF2IRD1基因能有效提高羊的繁殖力，而miR‑novel‑1007能够降低羊的繁殖力，因此，所述miR‑novel‑1007作为检测标志物在羊育种中的应用，同时还提供所述miR‑novel‑1007的抑制剂在提高羊繁殖力中的应用。

技术领域

本发明属于干扰RNA技术领域，具体涉及一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR-novel-1007及其应用。

背景技术

MicroRNAs(miRNAs)是非编码RNA的子集，是长度约22个核苷酸的内源启动的短RNA分子，被认为具有转录后调节靶mRNAs的功能。长期以来，由于技术和方法学的限制，miRNAs的意义一直被忽视，直到最初发现两个miRNAs(Lin-4和let-7)，通过与目标mRNAs的3'UTR不完全碱基配对来抑制其翻译，进而控制线虫的发育时间。miRNAs不仅在细胞生长周期、细胞分化、增殖和凋亡中起调控作用，而且在肿瘤发生和宿主-病原体相互作用中也有调节作用。MiRNAs通过碱基配对与完全或接近完全互补的mRNAs 3'UTR区的序列基序控制目标表达。3'UTR区中某些富含AU的元件被发现与miRNAs相互作用，并直接或间接地作为有效的转录后调控信号。对miRNA靶点的分析表明，3'UTR较长的基因通常具有较高的miRNA结合位点密度，主要参与发育调控；而3’UTR较短的基因通常具有较低的miRNA结合位点密度，并倾向于参与基本的细胞过程。这些结果验证了3'UTR在与miRNAs相互作用中的重要性。也有研究者报道，来自动植物的一部分miRNAs是通过结合mRNAs的5'UTR来发挥作用。因此，许多miRNAs可能在5'UTR和3'UTR区域含有重要的与miRNA相互作用的位点。3'UTR是miRNAs的一个重要但不是唯一的结合靶标，这一事实为miRNAs留下了一种可能性，即miRNAs通过多种途径或模式识别它们的靶标。

目前，现有技术中有关于miRNAs在调节动物生殖方面的报道，例如公开号为CN109136388A的专利公开了一种半滑舌鳎差异表达的microRNA标签，以解决半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼在生殖遗传差异的区分问题。然而，在山羊中是否有靶向作用繁殖力相关的基因的miRNAs还未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR-novel-1007，所述miR-novel-1007通过与靶基因GTF2IRD1的3'UTR区域的结合位点，实现调控GTF2IRD1基因表达水平。

本发明提供了一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR-novel-1007，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供了一种所述miR-novel-1007的检测方法，包括以下步骤：

将用引物对对样本进行PCR扩增，得到PCR产物进行分析，得到279bp的DNA片段则判断样本中含有miR-novel-1007；

所述引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQID NO:3所示的反向引物。

优选的，所述PCR扩增的反应程序为95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃变性30s，72℃延伸30s，40个循环；72℃延伸7min。

优选的，所述PCR产物的分析方法采用琼脂糖凝胶电泳完成。

本发明提供了一种所述miR-novel-1007的激动剂，包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物。