[发明专利]神经丝轻链蛋白检测试剂盒

说明书

本发明涉及诊断神经退行性疾病标志物的试剂盒，尤其涉及检测神经丝轻链蛋白(NF‑L)的试剂盒，所述试剂盒基于单分子检测技术来检测NF‑L。另外，还涉及用于检测NF‑L的单分子检测系统。本发明能够在快速检测的同时实现极高的灵敏度，而且试剂盒的稳定性高、体系简单、成本低。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，尤其是涉及一种基于单分子计数的检测神经丝轻链蛋白(NF-L)的试剂盒、以及用于检测神经丝轻链蛋白的单分子检测系统。

背景技术

神经丝轻链蛋白(NF-L)是神经丝(NFs)的一个组成部分，与神经胶质丝一起，是神经系统中间丝(IFs)的主要类型。其生理功能是通过保持特征细胞形状、轴突和树突之间的细胞内交通调节，以及间接的神经传导速度调节来维持轴突直径，从而赋予机械应力抗性。最近的研究表明，它们对正常的突触功能也很重要。轴突功能障碍和退行性变是神经退行性疾病(NDDs)发病机制中的重要步骤，早在神经细胞死亡之前就已发生，通常在可检测到的错误折叠蛋白质沉积之前。在这些过程中，神经丝轻链蛋白重新释放到细胞外空间，从而进入体液，如脑脊液(CSF)和血液。

神经丝轻链蛋白浓度是轴突变性的重要指标。血清/血浆神经丝轻链蛋白浓度与脑脊液神经丝轻链蛋白密切相关，直接反映中枢神经系统内的神经退行性变。在多方面的场景中，神经丝轻链蛋白是目前最有希望的早期识别一般神经退行性过程的候选生物标记物，能够支持疾病诊断、预后和进展，以及监测最终的疾病改善治疗。因此，研究开发神经丝轻链蛋白诊断试剂盒具有非常重要的临床价值。

目前已知的NF-L检测方法主要有酶联免疫吸附测定法(参见专利文献1)、化学发光法(参见专利文献2～4)、基于化学发光的单分子检测法(参见专利文献5)、免疫层析法(参见专利文献6)、荧光免疫分析法等。

具体而言，专利文献1公开了用于发光酶联免疫吸附(ELISA)的试剂盒及体外检测设备，所述试剂盒包括：体液样品稳定化用水溶液，体液样品中含有神经损伤标志性蛋白成分，在该体液样品稳定化用水溶液中，溶质包括人血清、动物血清白蛋白、无机碱金属盐、Tris碱、蛋白变性剂以及非离子型表面活性剂，该水溶液的pH值为6.7～7.6；以及，任选地包括的抗神经损伤标志性蛋白成分的抗体。其采用发光ELISA法，虽然较之常规的ELISA法获得了更高的灵敏度，但操作步骤仍然繁琐，耗时长(1～2小时，由ELISA方法自身特点决定)，且灵敏度也只有20pg/mL左右。